superdex 200分离范围

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1、GEHealthcare应用手册18-1118-55AB凝胶过滤Superdex200制备级-无与伦比的分辨率和速度自从Sephadex™应用以来，凝胶过滤一直在琼脂糖交联生物分子纯化方面占据重要的地位。凝胶过葡聚糖滤中，溶液中生物分子通过填充凝胶基质的层析柱，由于分子大小不同而分开。凝胶过滤是一种温和的分离技术，根据特定生物分子的要求，在非常宽泛的条件下进行操作。图1.Superdex200制备级上某个基质球形表面的假在设计凝胶过滤基质时，一个内在问题在于想图。如何将可控的孔径范围以及化学物理稳定性和惰性进行有效地结合。与Se

2、phadex相比，Superdex具有更高的分辨率，这一点通过色谱图和SDS-PAGE得到Sephadex已经成为许多新型凝胶过滤介质证实，见图2和3。比较的标准。Sephadex由于其孔径分布的缘故，具有物化惰性和卓越的选择性，然而物节省时间理强度不够。由于刚性基质比柔软基质可在更高的流速下使用，因此Superdex200制备级层析柱运Superdex™采用葡聚糖和琼脂糖混合物作为作只需要不到两小时，而SephadexG-200基质，将Sephadex陡峭的选择曲线特点和的典型运作则需要过夜，见图2。高度交联琼脂糖的物理和化学

3、稳定性相结合，见图1。正因为这些性质，Superdex200除了样品制备外，在Sephadex上进行样品制备级即使在高流速的情况下也能获得极分离所需的时间还包括了介质的装填（膨高的分辨率，这一点在下文中有明显的说胀，除气，填充，平衡和柱床检查）。所需明。Superdex200制备级的颗粒大小分布范时间的差别在表1和图4中列出。使用围很窄（平均34um），最适合用于制备型Superdex预装柱时，纯化的样品可在3小时的凝胶过滤。零20分钟得到，而使用填充SephadexG-200的XK16/70层析柱则需要56个小时。如此与Sep

4、hadexG-200相比，Superdex200制差别何等显著。备级的分辨率将小鼠单克隆细胞上清，IgG1分别加载于填放大充有Superdex200制备级和SephadexG-200Superdex200制备级可在保证性能的同时轻的层析柱中。两根柱都在该介质推荐的最大松地放大，如图5A和5B中所示。流速下进行运作。收集各成分，并通过SDS-PAGE对其纯度进行分析。层析柱：A）填充SephadexG-200的XK16/70层析柱缓冲液：phastGel缓冲SDS条B）HiLoad16/60Superdex200pg样品体积：1μ

5、l柱体积，CV：大约120ml标准：LMW-SDSMarker剂盒样品：小鼠单克隆细胞上清，IgG1染色：银染，根据生厂商提供的方案进行样品预处理：通过Amincon™浓缩细胞PM10滤器进行浓系统：PhastSystem™缩，约40倍样品体积：1.2ml（1%的柱体积）缓冲液：50mM的磷酸二氢钠，0.15M的氯化钠，pH7.0流速：A）0.2ml/min（6cm/h）泳道1：LMW分子标准B）1.6ml/min（50cm/h）泳道2：初始物质，含系统：带FPLCdirector™软件的FPLC™系统小鼠IgG1的细胞培养上清

6、泳道3：成分9泳道4：成分14泳道5：成分22泳道6：成分29泳道7：成分38泳道8：LMW分子标准图3.SDS-PAGE和银染对Superdex200制备级收集的各成分进行纯度检测（图2B）。SDS-PAGE纯度检测：PhastGel™Gradient10-15图2.采用A）SephadexG-200和B）Superdex200制备级对小鼠单克隆细胞上清中IgG1进行纯化的色谱图。进行纯化的色谱图。表1.采用SephadexG-200和Superdex200制备级进行纯化的时间表。表中的数据代表纯化方案中每一步所需的时间，以小

7、时为单位。填充SephadexG-200的XK填充superdex200制备级的HiLoad16/60Superdex20016/70（小时）XK16/70（小时）（小pg，预填充柱（小时）膨胀4不需要不需要除气10.5不需要填充161.5不需要平衡1522填充床检查101不需要上样和洗脱101.31.3总时间566.33.3填充SephadexG-200的XK16/70时间（小时）膨胀填充用适配器进平衡（1.5倍柱体积）填充床检查上样结果除气行填充结果需要56h填充superdex200制备级的XK16/70时间（小时）结果需

8、要6h20min结果清洗凝胶匀浆上样填充床检查填充平衡（1.5倍柱体积）用适配器进行填HiLoad16/60Superdex200pg时间（小时）结果需要3h20min结果上样平衡（1.5倍柱体积）图4.通过SephadexG-200，superdex200制备