superdex 75 翻译版

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1、Superdex75Superdex200前言Superdex™7510/300GL和Superdex20010/300GL均是Tricorn™高效柱。该柱子是用于高效过滤分离蛋白、多肽、小于200bp的DNA片段及其他生物分子的预包装玻璃柱子。该柱子有两个手拧接头1/16"，一个用于接AKTAdesign™系统，与一个1/16"female/M6male一起接FPLCTM系统。柱子相关数据基底柱床尺寸柱床体积柱效率（N/M）平均粒度通常使用时pH稳定范围清洗时pH稳定范围工作时温度储藏温度复合交联琼脂糖和右旋糖酐10×300–310m

2、m大约24ml>30000m-113um3-121-144-40℃4-30℃Superdex75Superdex200球状蛋白的排阻极限约为1×105约为1.3×106球状蛋白最佳分离范围3000-7000010000–600000右旋糖酐（葡聚糖）500–300001000–100000推荐最大流速（水，室温下）1.5ml/min1ml/min柱内最大压力1.8Mpa，18bar，261psi1.5MPa,15bar,218psi初次使用图一展示如何锁接头器。黑色的锁环必须在下防止柱床高度的改变。将柱子连接柱层分析仪之前，要确保管道与

3、阀门处没有气泡。将注资上的储存/输送装置及止塞移除。检查上方的接头器是否锁上（将锁环压下去，见图一）。确认柱子的进口已经注满液体，并且一级级接入系统。平衡后第一次使用或长期存储柱子如下操作：a）至少用50ml蒸馏水在0.5ml/min的速度下清洗50ml洗脱液在0.5ml/min流速下洗涤确保其回压不超过推荐的最大压力值。先以以下条件试一下洗脱液50mM磷酸缓冲液（PBS）0.15MNacl，pH7.0流速室温下，0.5-0.75ml/min样品体积25ul在同样的洗脱缓冲液中就没必要平衡了，认真阅读“优化”这一部分了解如何优化蛋白分离

4、。缓冲液与耐溶剂在喷射阀前安装一个滤器。如果缓冲液与溶剂有增强粘性，那会影响负压与流速。所有的溶剂全都要经过脱气与0.22um滤器过滤。日常使用所有常用缓冲液，pH均在3-12之间尿素8M乙腈达到缓冲液的30%离子型和非离子型洗涤液盐酸胍6M三氟乙酸10%甲酸70%洗涤液乙腈30%氢氧化钠1M乙醇70%甲醇100%乙酸1M异丙醇30%盐酸0.1M禁止：氧化物剂未过滤溶液建议样品状态分子量3000-70000（75）10000-600000（100）蛋白浓度样品中蛋白≤10mg样品体积25-500ul准备将样品溶解于洗脱液，用0.22um

5、的旅途过滤除菌或10000g离心10min。深入信息运输/储存柱子有一个储存/运输装置来保证柱内压，同时防止柱子干掉。柱子用脱气的20%的乙醇平衡。如果柱子后后需要储存2天之上，用2倍柱体积的蒸馏水洗涤，后用制定好2倍柱体积的20%乙醇洗涤。在此提醒要按图一将储存/运输装置连接好以便长期储存。玻璃管用一塑料保护膜套起来，会有少量空气存留在玻璃跟塑料保护膜之间。如何除去其存储/运输设备（见右图）（1）按下弹簧帽（2）移去锁定栓（3）松开帽，把装置拧开如何重装该装置(见右图)(1)在储存或运输装置上接一个注射器或泵，并且往里注入20%的乙醇

6、，超过管子上的刻度线即可。把注射器或泵移除。(2)赶净气泡后，将柱塞压到柱上的刻度线处。如何连接储存/运输设备（见右图）（1）在柱子的进出口接头处注入20%的乙醇，将装好的装置逐级连接在柱子顶部。（2-3）附上弹簧帽，用锁栓固定洗脱液的选择选择一种保证样品完全溶解的洗脱液。也尽量选择一个能简化下游应用程序的洗脱液。例如，若蛋白或多肽是冻干的，则需要挥发性洗脱液。低盐浓度下，基于依赖于pH7.0，酸、碱性蛋白会相互反应，此时推荐使用50mM磷酸钠0.15M氯化钠pH7.0的缓冲液。表一列出了一些常用的洗脱液组分。表一常用洗脱液组分pH洗脱

7、液液或缓冲液特性/应用实例5.00.1M醋酸铵能很好地溶解一些酶，如纤维素酶，其不稳定7.20.05M磷酸盐+0.15M氯化钠生理状态7.80.15M碳酸氢铵适用于分离DNA与蛋白；不稳定，需要现配现用8.00.1MTris-Hcl，1MmEDTADNA、RNA极易溶解8.66M盐酸胍，50mMTris-Hcl适合在非自然状态下纯化蛋白11.50.05M氢氧化钠较好的溶解复合物缓冲液添加剂在适宜缓冲液中添加30%乙腈用于分离疏水性聚合物，易挥发8M尿素（pH﹤7）能溶解大部分聚合物，低尿素浓度下可保持生物活性，对蛋白的氨甲酰化有影响。6

8、M盐酸胍决定亚基的分子量0.1%SDS，Tween或类似物溶解一些蛋白，例如膜蛋白确保与去垢剂彻底平衡过最优化参照“先以以下条件试一下”部分的描述运行第一次。如果结果不满意的话，请考虑以下：操作效果增加流速