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《焦磷酸测序检测RAR_2基因启动子甲基化方法的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第四军医大学学报(JFourthMilMedUniv)2009,30(14)http://www.fmmuxb.cn1285研究原著文章编号:10002790(2009)14128504焦磷酸测序检测RAR2基因启动子甲基化方法的建立李宏伟,李慎,梁平,赵锦荣,黄启超,郭晏海,雷小英,刘永兰,隋文君,张菊,颜真(第四军医大学药学系药物基因组学教研室全军基因芯片重点实验室,陕西西安710033)Establishmentofmethylationspecific常人全血中提取基因组DNA.采用复合巢式PCR的方法扩增目的基因,克隆构建对照标准品质粒.使用甲基化特异性
2、pyrosequencingforRAR2gene焦磷酸测序检测RAR2基因启动子CpG岛的5个甲基化位promotermethylationdetection点,双脱氧测序验证.将阳性和阴性对照标准品质粒PCR扩LIHongWei,LIShen,LIANGPing,ZHAOJinRong,HUANG增产物按不同比例混合后进行焦磷酸测序,检测每个点的甲QiChao,GUOYanHai,LEIXiaoYing,LIUYongLan,SUI基化程度,制作校正曲线.结果:构建了甲基化特异性焦磷酸WenJun,ZHANGJu,YANZhen测序阴性对照和阳性对照标准品.经焦磷酸
3、测序检测后,阴DepartmentofPharmacogenomics,PLAKeyLaboratoryofGene性对照标准品甲基化程度为0%,阳性对照标准品甲基化程Chip,SchoolofPharmacy,FourthMilitaryMedicalUniversity,度为100%,与双脱氧测序结果一致.经对混合样品检测,甲Xian710032,China基化频率符合线性关系,线性相关性大于0.99,斜率约为1,并且所有位点的标准偏差约为1%.结论:成功构建了甲基Abstract!AIM:Toestablishamethylationspecificpyrose化特异性焦磷酸测
4、序检测RAR2启动子区域甲基化阳性对quencingmethodfordetectingRAR2methylationinthegene照和阴性对照标准品质粒.建立了甲基化特异性焦磷酸测序promoterregion.METHODS:GenomicDNAwasextractedfrom检测基因启动子甲基化的方法.humannormalwholeblood.Targetedgenefragmentwasamplified关键词!RAR2;启动区(遗传学);甲基化;焦磷酸测序bycompositenestedPCRandclonedintopMD18Tvectorfor中图号!R39
5、4.3文献标识码!Aconstructingcontrolplasmid.FivemethylationlociweredetectedinRAR2genepromoterCpGislandbypyrosequencingafter0引言bisulfitetreatment,andtheresultswereconfirmedbydideoxyDNA甲基化是一类新的生物标志物,它与肿瘤chainterminantsequencingmethod.Thedegreeofmethylation的发生发展密切相关.此概念是人类基因组计划完wasdetectedindifferentp
6、roportionadmixtureofcontrolPCR成之后表观遗传学研究的重要成果.通过对DNA甲productsandthenthecalibrationcurvewasmade.RESULTS:基化修饰的研究,有可能为肿瘤发病机制的阐明、肿Negativecontrolandpositivecontrolplasmidsformethylation瘤早期诊断和治疗开辟新的有效途径.目前常用的specificpyrosequencingweresuccessfullyconstructed.Thedegree甲基化分析方法是甲基化特异性PCR(Methylationofmeth
7、ylationwas0%innegativecontroland100%inpositiveSpecificPCR,MSP),但存在引物多、操作复杂、不适contro.lBydetectingmixedsamples,wefoundamethylationlinearrelationshipbetweenthefrequencyofcomplex,withthe用于临床常规配型等缺点.焦磷酸微测序技术(Pylinearcorre
