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1、第28卷,第1期光谱实验室Vol.28,No.12011年1月ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryJanuary,2011地木耳多糖的提取工艺研究a,ba张唐伟李天才a(中国科学院西北高原生物研究所西宁市西关大街59号810008)b[中国科学院研究生院北京市石景山区玉泉路19号(甲)100049]摘要为了筛选地木耳多糖的最佳提取条件,本试验用水提取地木耳多糖,以提取温度、提取时间、4液料比和提取次数为主要因素,采用L9(3)正交试验进行提取工艺的优化;用苯酚-硫酸法测定多糖含量后计算多糖得率。结果发现,影响地木耳多糖提取的主
2、要因素由大到小依次为提取温度>提取次数>提取时间>液料比。通过正交试验及其验证试验确定地木耳多糖最佳提取条件为:提取温度90℃,提取次数5次,提取时间3h,液料比60∶1,在此条件下,地木耳多糖得率可达13.75%。关键词地木耳;多糖;提取;正交试验中图分类号:O657.32文献标识码:A文章编号:1004-8138(2011)01-0144-051引言地木耳(Nostoccommunevauch)俗称地皮菜、地耳、鼻涕肉、地踏菜、地软、地衣、地捡皮等,为藻类蓝藻纲念珠藻科(Nostocaceae)念珠藻属植物念珠藻(Nostoccommunevauch)的藻体。它与
3、发菜[1](N.flagelliforme)、葛仙米(Nostocsphaeroideskutzing)为同属植物。地木耳是世界广生种,主要[2]分布在石灰石区和喀斯特岩溶地带。在我国几乎都有分布,资源丰富,并且生命力极强,即使休眠[3]几十年,一遇水又马上恢复生机。地木耳一般在夏秋季雨后采收,去杂质洗净,鲜用或晒干。地木耳含有丰富的蛋白质、多糖、维生素、钙、磷、铁等,《本草纲目》记载:地木耳气味甘、平、无毒,明目益气,补肾。《中国药典》记载:野生地木耳对补充维生素、蛋白质,清热解毒,凉血明目,治疗夜盲、皮疹赤热等有明显滋补食疗效果。从植物中提取多糖的提取剂有酸液、碱
4、液、酶及热水,不同提取液多糖[4]得率差异较大,以水提取成本低,方便实用。本文采用热水提取地木耳多糖,利用正交试验的原理,以提取温度、提取时间、液料比和提取次数为主要因素进行了正交试验,确定地木耳多糖的最佳提取条件,为地木耳多糖的开发及利用提供科学依据。2实验部分2.1仪器与试剂RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHB-III循环水式多用真空泵(陕西太康生物科技有限公司);721可见光分光光度计(上海第三分析仪器厂);LG10-24A型离心机(北京医用离心机产);420型指针仪表电热恒温水箱(北京中兴伟业);电子天平(美国派布洛克公司)。葡萄糖、苯酚、浓
5、硫酸、乙醇等其他试剂均为分析纯。实验用水为蒸馏水。联系人,手机:(0)13519710591;E-mail:zhangtangwei04@163.com;tcli@nwipb.ac.cn作者简介:张唐伟(1987—),男,山东省菏泽市人,硕士研究生,研究方向为药用植物化学。收稿日期:2010-04-23;接受日期:2010-05-24第1期张唐伟等:地木耳多糖的提取工艺研究145地木耳采于西宁市西山,采回后清水洗去泥沙,并用蒸馏水冲洗3遍,于烘箱中烘干(60℃,12h),粉碎后过筛。2.2实验方法2.2.1校准曲线绘制[5]采用苯酚-硫酸法,在490nm处测定吸光度
6、。以葡萄糖的浓度C(g/mL)为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制吸光度-葡萄糖浓度的校准曲线,其线性回归方程为C=0.0134A+0.0092,2r=0.9956,葡萄糖含量在10—50g/mL范围内呈良好的线性关系。2.2.2提取方法准确称取地木耳粉末2.0000g,按一定液料比加入蒸馏水,于恒温水浴中提取,然后过滤,滤渣用同样的方法提取,合并上清液,用旋转蒸发仪将上清液浓缩到适当体积后,缓慢加入3倍体积的无水乙醇,4℃低温放置过夜,可见白色絮状粗多糖析出,4500r/min离心20min,收集沉淀物,干燥得粗多糖。采用苯酚-硫酸法测定粗多糖中多糖含量,计算多糖得
7、率。计算公式:多糖得率(%)=(粗多糖中多糖含量/地木耳干重)×100%2.2.3单因素试验料液比采用1∶40、1∶50、1∶60、1∶70、1∶80,5个水平,浸提温度采用50、60、70、80、90℃5个水平,浸提次数采用1、2、3、4、5,5个水平,浸提时间采用1、1.5、2、2.5、3h5个水平分别做单因素试验。[6]2.2.4正交试验4在上述单因素试验的基础上,采用L9(3)正交试验进行提取工艺的优化,以液料比(A)、提取温度(B)、提取时间(C)及提取次数(D)为试验因素,以粗多糖得率为指标进行正交设计试验,对地木耳多糖的提取工艺进行优化
