共表达TrxA和DsbC对富含二硫键的异源蛋白在大肠杆菌中表达的影响

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1、维普资讯http://www.cqvip.comISSNl【x】7—7626中国生物化学与分子生物学报2【x】2年8月CN11-3870／QChineseJournalofBiochemistryandMolecularBio1ol8(4)：486～489．M-．，、表达TrxA和DsbC对富含二硫键的异源蛋白在大肠杆菌中表达的影响刘志冈1，林建波，康铁军，俞炜源(军事医学科学院生物工程研究所，北京100071)摘要以复制子为pl5A的质粒pACU184为基础，构建了3种表达硫氧还蛋白(TrxA)或／和二硫键异构

2、酶(DsbC)的表达质粒．经IPTG诱导，克隆的DsbC和TrxA都以可溶的形式高表达．分别将构建的3种表达质粒与复制子为colEl并克隆有人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体一低分子量尿激酶融合基因(C6．UK)的表达质粒共转化大肠杆菌XL1一blue，在30~C用IPTG诱导表达．SDS—PAGE显示，共表达TrxA或DsbC都能导致C6一UK融合蛋白的部分可溶性表达，而且同时共表达TrxA和Dsbc2种分子时，C6．UK完全以可溶形式表达，但表达量降低．分别用溶圈法和ELISA检测了各种共表达时可溶表达产物的生物活

3、性．结果显示，只有共表达OsbC时才能检测到明显的C6一UK融合蛋白的双功能．关键词硫氧还蛋白，二硫键异构酶，低分子量尿激酶，共表达中图分类号Q78TheInfluenceofCoexpressionofTrxAandDsbCtotheExpreesionofHeterogenousProteinwithMultipleDisulfideBondsLIUZhi—gang，LINJian—bo，KANGTie—jun，YUWei—yuan(InstituteofBiotechnolog?，Academ?D厂Mili

4、tamMedicalSciences，Beijing100071，China)AbstractBasedontheplasmidpACU184thatcarriedtheoriginofreplicationfromplasmidp15A，threeex—pressionvectorsthatcouldexpressdisulfideisomerase(DsbC)and／orthioredoxin(TrxA)wereconstructed．Af—terinducedwithIPTG．clonedDsbCandTn

5、(Acouldbeexpressedinsolublefoin3withhighlevelinE．col．ThesethreevectorswererespectivelytransformedintoE．coliXL1一bluetogetherwithacompatibleexpressionvectorforthefusedgeneofhumanizedmouseanti—humanfibrinScFvandlOWmolecularweightsinglechainurokinase(C6一UK)．Witht

6、heinducementof1mmol／LIGat30oC，SDS—PAGEshowedthatC6一UKwasex—pressedinpartiallysolubleformwithco—expressionofeitherDsbCorTrxA，butitwasexpressedintotallysol—ubleformwithco—expressionofbothDsbCandTrxATheexpressionlevelinthelattercasewaslowerthantheformer。Bvthemet

7、hodsofdissolvedcircleandELISA，thebioactivityofC6一UKwasassayedfordifierentco—expressions．TheresultsclearlyshowedthatbioactivefusedproteinsC6一UKwereonlyobtainedbyco—expres—sionofDsbC．Keywordsthioredoxin．disulfideisomerase，lOWmolecularweightsinglechainurokinase，

8、co—expression异源蛋白，特别是富含二硫键的异源蛋白在大肠杆菌中高表达时通常以不溶的包涵体形式存在．收稿日期：2001．10．26；接受日期：2001-12-07为解决异源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达，国内基金项目：国家高技术研究发展计划项目(No。102-09-03-O1)联系人Tel：(010)66948828，E．mail：liuzg@nic．bmi．ac