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《温度对重组大肠杆菌生长及外源蛋白表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、华东理工大学学报VO1.28NO.2364JOurna1OfEaStChinaUniVerSityOfScienceandTechnO1Ogy2002-04文章编号:1006-3080(2002)04-0364-04温度对重组大肠杆菌生长及外源蛋白表达的影响叶姣陈长华夏杰付水林杨雅琴(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237)摘要:对重组大肠杆菌(E.colz)BL21(DE3)发酵生产rhCu/Zn-SOD的诱导温度进行了优化考察了37C和30C下重组菌的生长规律及产物表达,在5L自控发酵罐中的发酵结果表明:较低温度时菌体的比生长速率较低菌体活性与质粒稳定性有很大
2、程度的改善外源蛋白稳定性与可溶性也有一定的提高;30C诱导时rhCu/Zn-SOD的酶活性最高每毫升发酵液的酶活力为4757U约为37C诱导时的2.7倍,关键词:重组大肠杆菌;超氧化物歧化酶;诱导温度;发酵;表达中图分类号:TO920.6文献标识码:AEffectoftemperatureonthegrowthofrecombinantE.coliandontheExpressionofrecombinantproteinYEJzaoCHENChang-huaXIAJzeFUShuz-lznYANGYa-gzn(StatekeyLabo1ato1yofBzo1eacto1Engzn
3、ee1zngECUSTShanghaz200237Chzna)Abstract:TheeXpreSSiOnOfrhCu/Zn-SODinrecOmbinantE.colzBL21(DE3)atdifferentinductiOntemperatureSWaSinVeStigated.ThegrOWthOfE.colzandtheeXpreSSiOnOftherecOmbinantprOteinWereStudiedandcOmparedat37COr30C.TherecOmbinantE.colzWaScu1tiVatedin5LfermentOrreSu1tSOfWhichShO
4、Wedthatat30CtheSpecificgrOWthrateWaSreducedWhi1etheViabi1ityOfrecOmbinantE.colzandp1aSmidStabi1ityWeregreat1yincreaSed.TheStabi1ityandSO1ubi1ityOftherecOmbinantprOteinWerea1SOimprOVed.ThemaXimumenZymeactiVityOfrhCu/Zn-SODeXpreSSedat30CWaSincreaSedtO4757U/mLWhichWaS2.7timeSaSthatat37C.Keywords:
5、recOmbinantE.colz;SuperOXidediSmutaSe;inductiOntemperature;fermentatiOn;eXpreS-SiOn用基因重组技术构建生物工程菌发酵工艺的目度下重组大肠杆菌的生长速率和外源蛋白表达的考的是为了获得大量的外源基因产物但外源基因的察探索温度与生长~质粒稳定性之间的关联及其机高水平表达不仅涉及宿主~载体和克隆基因之间的理并寻找试验菌生长和产物形成的最适温度[1I,相互关系而且与其所处的环境条件息息相关,温度是影响基因工程菌生长~质粒稳定性和重组产物形1材料与方法成的重要因素,大肠杆菌的最适生长温度为37C~39C然而在较高
6、温度下细菌的比生长速率较高1.1实验材料发酵过程中容易积累代谢副产物反过来又抑制菌1.1.1菌种重组大肠杆菌BL21(DE3)/rhCu/体的生长和目的产物的表达,本课题通过对不同温Zn-SOD由本课题组构建,E-mail:ye-jiaO@163.net1.1.2培养基摇瓶种子培养基:LB培养基用前收稿日期:2001-09-12加入200mg/L氨苄青霉素(Amp),发酵培养基(g/作者简介:叶姣(1977-)女湖南人硕士研究方向为发酵工程,第4期叶姣等:温度对重组大肠杆菌生长及外源蛋白表达的影响365LD:蛋白胨ll.25,酵母膏ll.25,(NH4D2SO43.0,液为外源蛋白
7、可溶部分,取l00pL加l00pL上样缓Na2HPO42H2O28.6,KH2PO42.7,接种前加入冲液混合上样;离心沉淀物加Tris-EDTA缓冲液至200mg/LAmpO补料培养基(g/LD:蛋白胨l50,酵与超声波碎时等量体积,待沉淀物完全溶解后再离母膏l50O诱导剂:乳糖,诱导剂量为20g/LO心,其上清液为外源蛋白不可溶部分,取l00pL加l.l.3仪器电泳扫描仪,天能科技有限公司;l00pL上样缓冲液混合上样O比较SDS-PAGE电泳PAGE-200l型
