GB∕T 38095-2019 DHA、EPA含量测定 气相色谱法

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1、犐犆犛０７．０８０犃２１中华人民共和国国家标准犌犅／犜３８０９５—２０１９犇犎犃、犈犘犃含量测定气相色谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱狅犮狅狊犪犺犲狓犪犲狀狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱犲犻犮狅狊犪狆犲狀狋犪犲狀狅犻犮犪犮犻犱犮狅狀狋犲狀狋—犌犪狊犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔２０１９１０１８发布２０１９１０１８实施国家市场监督管理总局发布中国国家标准化管理委员会犌犅／犜３８０９５—２０１９前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：中国水产科学研究院、中国水产科学研究院南海水产研究所、中国标准化研

2、究院、浙江省海洋水产研究所、北京萨姆伯科技有限公司、河北养元智汇饮品股份有限公司、中国农村技术开发中心、华测检测认证集团北京有限公司、中国科学院过程工程研究所。本标准主要起草人：杨贤庆、荣辉、李乐、张小军、邓建朝、马爱进、岑剑伟、李来好、马海霞、宋金龙、郝帅、姚奎章、戴炳业、董立雅、黄永东、夏君霞、赵慧博、齐兵、崔岩。Ⅰ犌犅／犜３８０９５—２０１９犇犎犃、犈犘犃含量测定气相色谱法１范围本标准规定了用气相色谱法测定二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）、二十碳五烯酸（ＥＰＡ）含量的方法。本标准适用于鱼油、微藻中ＤＨＡ、ＥＰＡ含量的测定。本标准不适用于乙酯化的鱼油测定。本方法检

3、出限为１０ｍｇ／ｋｇ，定量限为３３ｍｇ／ｋｇ。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３原理试样经三氯甲烷甲醇法提取油脂，然后经甲酯化后，气相色谱毛细管柱分离，氢火焰离子化检测器检测，内标法定量。４试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。４．１水：ＧＢ／Ｔ６６８２，一级。４．２甲醇：色谱纯。４．３正己烷：色谱纯。４．４犇犎犃：纯度≥９８％。４．５犈犘犃：纯度≥９８％。４．６十七碳烷酸

4、：纯度≥９８％。４．７０．８犿狅犾／犔氢氧化钾甲醇溶液：称取５．２４ｇ氢氧化钾溶于１００ｍＬ无水甲醇中，充分混匀。４．８２．０犿犵／犿犔十七碳烷酸内标储备液：称取０．０５００ｇ十七碳烷酸于２５ｍＬ容量瓶中，加入适量正己烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀。４．９犇犎犃和犈犘犃标准工作溶液：分别称取０．０１００ｇ的ＤＨＡ和ＥＰＡ标准品于５ｍＬ容量瓶中，加入适量正己烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀。然后分别取０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．４ｍＬ、０．８ｍＬ、１．５ｍＬ于５个１０ｍＬ容量瓶中，分别移入十七碳烷酸内标储备液２．０ｍＬ，加入正己烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀。５仪器设

5、备５．１气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（ＦＩＤ）。１犌犅／犜３８０９５—２０１９５．２天平：感量０．０１ｇ、０．０００１ｇ。５．３研磨仪。５．４旋涡式振荡混合器。５．５超声波破碎仪。５．６真空干燥箱。５．７恒温水浴锅。６测定步骤６．１取样微藻：称取１０．００ｇ微藻，研碎后称取１．００ｇ均匀样品，待提取油脂所用。鱼油：取０．１０００ｇ。６．２提取取１．００ｇ微藻干粉试样，放入５０ｍＬ聚四氟乙烯试管中，加入６．０ｍＬ蒸馏水，加入三氯甲烷甲醇（１∶２，体积比）混合液２２．５ｍＬ，振荡混匀后用超声波破碎仪破碎２ｍｉｎ，加入７．５ｍＬ三氯甲烷振荡混匀３０ｓ，再加入

6、７．５ｍＬ蒸馏水振荡混匀３０ｓ，分液漏斗静置分层，分离油层，真空干燥，称重并计算油脂含量。６．３脂肪酸甲酯化称取０．１０ｇ油脂样品置于１０ｍＬ带盖离心管中，加入２ｍＬ乙醚正己烷（２∶１，体积比）混合液，摇匀后１５ｍｉｎ，加入０．８ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钾甲醇溶液２ｍＬ，摇匀后在６０℃恒温水浴下反应１５ｍｉｎ，沿壁加水到１０ｍＬ刻度处，静置分层，将上清液全部转移至量器内，用正己烷定容至１ｍＬ，稀释一定倍数后待进样分析。６．４测定６．４．１气相色谱参考条件气相色谱参考条件如下：ａ）色谱柱：聚二氰丙基硅氧烷毛细管柱（０．３２ｍｍ×０．２５μｍ×３０ｍ），或相当者；ｂ

7、）载气及流速：载气为氮气，流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ；ｃ）柱温程序：初始温度１６０℃（保持３ｍｉｎ），以６℃／ｍｉｎ速率升到２３０℃，保持１５ｍｉｎ；ｄ）进样口温度：２５０℃；ｅ）检测器温度：２８０℃；ｆ）进样量：１μＬ；ｇ）进样方式：分流进样，分流比５０∶１。６．４．２标准曲线绘制分别取不同浓度的标准工作溶液和空白溶液（正己烷）各１ｍＬ按６．３甲酯化后，依次进样，扣除空白值，分别测定ＤＨＡ甲酯、ＥＰＡ甲酯和十七碳烷酸甲酯的峰面积。分别以标准工作溶液ＤＨＡ和ＥＰＡ的质量浓度与内标物质量浓度的比为横坐标，以ＤＨＡ甲酯和ＥＰＡ甲酯分别与十七碳烷酸甲酯的峰面积比为纵坐

8、标，绘制标准曲线。色谱图参见附录Ａ中图