营养学实验指导(商品专业用)

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1、《食品营养学》实验指导(商品学专业教学用)天津商业大学生物技术与食品科学学院食品工程系鲁晓翔李海平主编2009年8月实验一果蔬中维生素C的测定方法一——2.6•二氯酚靛酚测定法一、实验目的:学习掌握2.6■二氯酚靛酚测定维生毒C的原理和方法。二、实验原理:还原型抗坏血酸能还原染料2.6■二氯酚靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2.6■二氯酚靛酚后,木身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2.6■二氯酚靛酚的量与样品中所含维生素C的量成止比。0-I70IOH-d反应式如下:I0一(

2、0+IITHO—CIH—CIH0—C—HICHOH还廉型抗坏血酸染料(粉红色)脱氢型抗坏血酸染料(无色)述原世抗坏血酸染料(粉红色)脱氢型抗坏血酸染料(无色)三、主要试剂:(1)2%草酸溶液:溶解20克草酸结晶于200毫升水中,然后稀释至1000mlo(2)1%草酸溶液:取上述2%草酸溶液500ml,用水稀释至1000mlo(3)抗坏血•酸标准溶液:准确称取20mg抗坏血酸,溶于1%草酸溶液屮,移入10ml量瓶屮,并用1%草酸溶液稀释至100毫升,混匀,置冰箱中保存。使用时吸取上述抗坏血酸5ml,置于50毫升容量瓶中,用1%草酸溶液定容之

3、。此标准使用液每毫升含0.02mg维生素C。标定:吸取标准使用液5mlT三角烧瓶屮,加入6%碘化钾溶液0.5ml,1%淀粉溶液3滴,再以0.001N碘酸钾标准溶液滴定,终点为淡蓝色。计算如下:V1x0.088抗坏血酸浓度(mg/ml)=V2V1;滴定时所耗0.00IN碘酸钾标准溶液的量(ml)V2:所収抗坏血酸的量(ml)0.088:1ml0.000IN碘酸钾标准溶液相当丁•抗坏血酸的量(mg/ml)(4)2.6:二氯靛酚溶液:称取碳酸氢钠52mg,溶T200ml沸水中,然后称取2.6•二氯靛酚50mg,溶解在上述碳酸氢钠的溶液屮,待冷,

4、置于冰箱中过夜,次日过滤置于250ml量瓶屮,用水稀释至刻度,摇匀。此液应贮于棕色瓶中并冷藏,每星期至少标定1次。标定方法:取5ml已知浓度的抗坏血酸标准溶液,加入1%草酸溶液5ml,摇匀,用上述配制的染料溶液滴定至溶液呈粉红色于15秒不褪色为止每毫升染料溶液相当于Vc的毫克数二滴定度(T)CxViV2式中:C;抗坏血酸(V)的浓度(mg/ml)V

5、:抗坏血酸的fi(ml)V2:消耗染料溶液最(ml)(5)0.1N碘酸钾溶液:精确取干燥的碘酸钾0.100mlo0.3567克用水稀释至100ml.(6)0.001N碘酸钾溶液:吸取0」N碘酸

6、钾溶液lml,用水稀释至100毫升。此溶液lml相当于抗坏血酸0.088mg。(7)1%淀粉溶液。(8)6%碘化钾溶液。四、操作方法:1、称取适量(50.0-100.0克)样品,加等量的2%草酸溶液,倒入组织捣碎机中捣成匀浆。称取10.00-30.00克浆状样品(使其含有抗坏血酸l・5mg),置于小烧杯中,用1%草酸溶液将样品移入100毫升容量瓶中,并稀释金刻度,摇匀。2、将样液过滤,弃去最初毫升滤液。若样液具冇颜色,用白陶土(应选择脱色力强但对抗坏血酸无损失的白陶土)去色,然后迅速吸取5-10ml滤液,置于50ml三角烧瓶屮,用标定的2

7、.6•二氯靛酚染料溶液滴定之,直至溶液呈粉红色于15秒内不褪色为止。计算:V.T每百克样甜中抗坏血酸毫克数=xl()()WV:滴泄时所耗去染料溶液的量(ml);T:1ml染料溶液和当于抗坏血酸标准溶液的量(mg)W:滴定时所取的滤液中含样站量(g)・五、说明:(1)所有试剂配制最好用重蒸1:留水。(2)样品取样后,应浸泡在已知量2%草酸溶液中使抗坏血酸受损失。以免发生氧化,使抗坏血酸受损失。(3)对动性的样品可用10%三氯醋酸代替2%草酸溶液捉取;对含冇大量Fe的样品,如储藏过久的罐头食品可用8%醋酸溶液代替草酸溶液提取。(4)整个操作过

8、程要迅速,防止还原型抗坏血酸被氧化。(5)若样品滤液无色,可不加色陶土。须加白陶土的,要对每批新的白陶土测定回收率。加白陶土脱色过滤后,样品要迅速滴定。(6)滴定开始时,染料溶液要迅速加入,直至红色不立即消失而后尽可能一滴一滴地加入,并要不断振动三角烧瓶,直至呈粉红色于15秒内不消失为止。样品屮可能有其他杂质也能还原2.6■二氯靛酚,但一般杂质还原该染料的速度均较抗坏血酸慢,所以滴定时以15秒钟红色不褪为终点。⑺测定样品溶液时必须同吋作一空白对照,样詁溶液滴定的毫升数须扣除空白液滴定的毫升数。方法二——24二硝基苯耕法一、实验原理:用酸处

9、理过的活性炭把述原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸再继续氧化为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2.4•二硝基苯脐偶联牛成红色的络合物。其呈色的强度与二酮古乐糖酸浓度成正比,可以比色定量。二、实验试

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