VF-PR-18-A微生物控制菌检查方法的验证方案

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1、编号：VF-PR-18-A文件类别：验证文件部门：质控部微生物控制菌检查方法的验证方案版次□新订起草人：验证小组方案批准人验证实施日期年月复印数份□替代起草日期：年月日审阅批准日期：年月日日批准人：分发至：质控部一、验证方案的制定二、验证方案的起草与审批三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案1.验证目的和原理2.验证方法步骤3.试验实施3.1试验前的准备3.2验证试验操作3.3试验结果4.验证结果评价分析5.附件微生物控制菌检查方法的验证-、验证方案的制定验证项目名称微生物控制菌检查方法的验证编号VF-PR-18-A验证小组组员成员职务姓名主要工作职责组长方案设计责任人

2、副组长方案实施负责人组员操作人操作人操作人操作人验证方案组织实施进度步骤实施日期二、验证方案的起草与审批1验证方案的起草验证项目名称微生物控制菌检查方法的验证编号VF-PR-18-A起草部门起草人签名日期生产部年月日质控部年月H2.验证方案的审核与批准验证方案审核人：审核口期：年月口验证方案批准人：批准日期：年刀日三、微生物控制菌检查方法的验证1.验证目的和原理1.1验证目的本实验是关于尿素维E乳膏的微生物控制菌检查试验的验证。验证结果应显示尿素维E乳膏的微生物控制菌试验方法，对检品中可能存在的微生物没有抑制作用，符合验证要求。1.2原理按照已建立的药品微生物控制菌检查方

3、法，通过已知菌数试液的对照菌的培养对照，验证其操作方法适合该药品的微生物控制菌的检测的正确性。2.验证方法步骤2.1验证前的准备将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应选择相应的阴性对照菌。2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物控制菌检测方法进行平行试验，通过观测是否长菌来判断。2.3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维E乳膏的微生物控制菌检查试验”对检品中微生物的抑菌性。试验结果应显示：阴性菌对照组不得检出阴性对照菌，试验组应检出试验菌。3•试验实施3.1实验前的准备3.1.1主要仪器设备：高压蒸

4、汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、生化培养箱、隔水式恒温培养箱。3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或防置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于5pa。3.1.3试验样品：尿素维E乳膏批号,批号,批号3.1.4稀释液和试剂：PH7.0无菌氯化钠蛋白腺缓冲液。3.1.5器具：无菌培养皿（直径90mm）无菌移液管5ml。3.1.6验证用微生物名称及其编号。实验菌株的来源：菌株名称编号大肠埃希菌(Escherichiacoli)cMcc(B)44102金

5、黄色葡萄球菌(Staphylococcus)cMcc(B)26003铜绿假单胞菌(Pseudomonanaeruginosa)cMcc(B)10104编号由菌名首字母一一传代代数一一制备H期组成3.1.7培养基名称生产商批号配制日期有效期营养肉汤培养基盐乳糖培养基3.2验证试验操作3.2.1试验菌种的制备和稀释接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至相应的营养肉汤或BL增菌液10ml中，30〜35°C培养18〜24小时。取各自菌悬液按lml加至9ml,0.9%无菌氯化钠溶液的10倍稀释法，制成含菌落数为50-100CFU的菌悬液。3.2.2验证试验操作用

6、不同类别的微生物考察供试液及检验程序的抑菌性，将试验分为2组：A试验组：准确取供试品10g,加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45°C的PH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液100ml,振摇5〜10分钟,萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。准确取规定量供试液及50〜100CFU试验菌加入相应增菌培养基中，按照药典依相应控制菌检查法进行检查。B阴性对照组：采用大肠埃希菌作为阴性对照用菌。方法同试验组。3.3试验结果记录：331证用微生物的稀释度和接种量菌种名称稀释度(1

7、0")接种浓度(CFU/ml)接种量(ml)大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单脆菌3.3.2试齡组和阴性对照组记录结果ST批号BL漠化十六烷基三甲镀琼脂G染色氧化酶绿脓菌素硝酸盐产气42°C明胶试验组阴性对照组铜绿假单胞菌批号营养肉汤升露醇氯化钠平板G染色血浆凝固酶试验组阴性对照组测试人/测试日期：复核人/复核日期:4.验证结果评价分析质控部负责各项验证、试验结果记录，验证小组根据验证、试验结果进行评价(附件1),起草验证报告(附件2),报验证委员会。(附件3)验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做岀验证结论，发放验证证书(附