纯化水控制菌检查方法验证方案及验证报告

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1、纯化水控制菌检查方法验证方案及报告文件编号:**VP*****.*文件类别：验证验证方案批准方案起草签名日期质量管理部方案审核签名日期QC负责人QA负责人质量管理部负责人方案批准签名日期验证领导小组负责人总经理验证小组人员名单组长姓名职务/职称部门成员姓名职务/职称部门目录1、引言52、验证参与部门及责任53、验证方法5文件要求6菌种6菌液制备6验证方法6验证结果74、结果判断75、验证结论及评价86、验证报告批准书91.引言1.1概述微生物限度检查法系检杳非规定灭菌制剂及原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、每菌数、酵母菌数及控制菌检

2、查。当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和控制菌检查方法的验证。进行上述验证前，应首先对验证过程中使用的仪器、仪表及微生物限度检查的环境进行验证。微生物限度检杳应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。除另有规定外，细菌培养温度为30-35°C；霉菌、酵母菌培养温度为23-28°C；控制菌培养温度为35-37°Co1.2验证目的确认所采用的方法适合于纯化水的控制菌检杳。1.3验证执行的文件超净工作台标准操作规程微牛物限度检杏法培养箱标准操作规程热压

3、灭菌锅标准操作规程2.验证参与部门及责任序号部门职责1质量管理部起草验证方案、组织实施验证2设备工程部仪器仪表校验3质量管理部设备、仪器操作，菌数的测定及结果判断3.验证方法：3.1文件要求所需文件内容编号存放地点仪器仪表校验合格证质检中心万级空气净化系统验证报告超净工作台验证报告培养箱验证报告热风循环干燥箱验证报告热压灭菌锅验证报告检查人：日期：3.2菌种验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。菌种类别传代次数菌种保藏现状大肠埃希菌[CMCC(B)441

4、02]金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003J确认人：口期：3.3菌液制备3.3・1分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物少许，各接种至5ml营养肉汤培养基屮，在36°C±1°C培养18・24小时，取均匀培养物lml用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1：10［制成每lml含菌数为10〜lOOcfti的菌悬液。其菌数在做验证试验的同时用营养琼脂平板涂布，经培养后计数确定。制备人：日期：3.4验证方法3.4.1试验组取纯化水原液lml和10〜100cfu试验菌加至100mlpH7.0氯化钠■蛋白丿冻缓冲液中，摇匀，过滤。取出滤膜接入lOOm

5、lBL增菌培养基屮，在36°C±rC培养18・24小时，取上述培养物0.2ml,接种于含5mlMUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液。3.4.2阴性对照组：设立阴性对照组是为了验证该控制菌检杳方法的专属性。方法同试验组，验证人肠埃希菌的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌。阴性对照菌不得检出。3.4.3阴性对照取0.9%无菌氯化钠溶液2ml,加入100mlpH7.0氯化钠■蛋白月东缓冲液屮，混匀，过滤。按试验组培养检测。阴性对照应无菌生长。3.5大肠杆菌检查法验证的测定结果：检测日期：年

6、月曰至年月曰菌类试验所用菌种试验所用阴性对照菌测定项目试验组阴性菌对照组阴性对照大肠埃希菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌BL增菌MUG培养慕管MUG管加靛基质麦康凯琼脂平板检测人：复核人:检测口期：年月口至年月□菌类试验所用菌种试验所用阴性对照菌测定项口试验组阴性菌对照组阴性对照大肠埃希菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌BL增菌MUG培养基管MUG管加靛基质麦康凯琼脂平板检测人：复核人:检测日期：年月曰至年月曰菌类试验所用菌种试验所用阴性对照菌测定项目试验组阴性菌对照组阴性对照大肠埃希菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌BL增菌MUG培养基管MUG管加靛基质麦康凯琼脂平板检测

7、人：复核人:4结果判断4.1阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。4.2若试验组检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查;若试验组未检出试验菌，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。确认结果确认人:6.验证结论及评价报告1、是否按规程内容完成，如未按规程进行理由：批准人：2、主要试验结果：项tl标准验证结果是否符合规定大肠埃希菌检查法验证1.阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。2.若试验组检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；

8、若试验组未检出试验菌，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这