16年4月蒲郁胶囊微生物限度检查法验证实验

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1、蒲郁胶囊微生物限度检查法验证实验样品:蒲郁胶囊，批号160102。生产厂家为：四川诺迪康威光制药有限公司。:枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]>金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]>铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[CMCC(B)10104]>大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102K白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]、乙型副伤寒沙门菌(SalmonellaparatyphiB)[CMCC(B)500

2、94]>黑曲霉菌(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]o金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌均在第5代内，均由省药检所提供。1.取经胰酪大豆腺液体培养基于30〜35°C、培养18-24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物lml加9mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液10倍稀释至10-5〜10-7,为50〜100cfu/ml,做活菌计数备用。2.取经沙氏葡萄糖琼脂于20〜25°C培养2〜3天的白色念珠菌新鲜培养物，lml加9ii】1PH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液10倍稀释至

3、10-5〜10-6，为50〜100cfu/ml,做活菌计数备用。3.取经沙氏葡萄糖琼脂于20〜25°C培养5〜7天的黑曲霉菌新鲜培养物，加3〜5ml含0.05%聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液洗下霉菌砲子，吸取出菌液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)。取1ml加9ml含0.05%聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液洗下霉菌砲子，逐管10倍稀释为10-4约50〜lOOcfu/ml,做活菌计数备用。供试液制备称取供试品10g,加至pH7.0氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml中，混匀，制备成1：10供试液，分别人工加入上述5种试验菌株。验证

4、试验1）1）试验组：取1：10供试液加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液中含菌量小于等于lOOcfu,吸取1ml加入平皿中，做两个平行样，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24〜72小时观察结果。2）菌液对照组：取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液中含菌量小于等于lOOcfu,测定每一菌株加的试验菌数。3）供试品对照组：取制备好的1：10供试液1ml加入平皿中，测定供试品本底菌数。4）稀释剂对照组:考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。表试验组回收率测定结果阳性菌实验次数菌液组菌落数试验组菌落数供试品对照组菌落数回收率％铜绿假单胞

5、1889280790088.3菌2899078750085.5枯草芽抱杆1808568700083.6菌2868976720084.6金黄色葡萄1869072790085.8球菌2928481800091.5白色念珠菌1767260660085.12807163600081.5黑曲霉菌1677559570081.72707460640086.1回收率=（试验组平均菌落数一供试品对照组平均菌落数）/菌液对照组平均菌落数X100%结果判断:从表（1）结果可以看出：采用平皿倾注法检验蒲郁胶囊供试品回收实验，人工加入5株菌株，该供试品对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孑包杆菌、白色念珠菌

6、、黑曲霉等5种菌的回收率实验均大于50%,可采用1:10供试液平皿倾注法进行蒲郁胶囊微牛物限度检验需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌计数。结论根据验证实验结果，确定蒲郁胶囊微牛物限度检查可采用将蒲郁胶囊制成1:10供试液平皿倾注测定需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌计数。控制菌检查方法的验证菌液制备：取经30〜35°C培养18〜24小时的大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌肉汤培养物1ml加9mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液10倍稀释至1ml含10〜lOOcfu的菌悬液，做活菌计数备用。乙型副伤寒沙门菌:86,85大肠埃希菌：80,89大肠埃希菌(1)试验组取供试液10ml及1ml大肠埃希菌菌悬液

7、(10〜lOOcfu),加入胰酪大豆腺液体培养基100ml屮，依大肠埃希菌检查法进行检查。(2)阳性菌对照组取lml大肠埃希菌菌悬液(10〜lOOcfu)加入胰酪大豆陈液体培养基100ml中，依大肠埃希菌检查法进行检查。(3)阴性对照组取10ml稀释液加入朕酪大豆腺液体培养基100ml中，依大肠埃希菌检查法进行检查。检验步骤胰酪大豆腺液体培养基麦康凯液体培养基麦康凯琼脂结论试验组+++检出阳性菌对照组+++检出阴性对照组———未检出结论：本品经验证试验，大