防风通圣胶囊微生物限度检查法验证试验

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1、防风通圣胶囊微生物限度检查法验证试验芜湖市食品药品检验所1.样品防风通圣胶囊(生产单位：芜湖市中医医院、批号：080616)2.验证用菌株大肠埃希菌［CMCC(B)44102］第2代、金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］第2代、枯草芽抱杆菌［CMCC(B)63501］第2代、白色念珠菌［CMCC(F)98001］第2代、黑曲霉［CMCC(F)98003］第1代。以上菌种均购自中国药品生物制品检定所。3.方法屮国药典2005年版微生物限度检查方法验证试验。验证试验应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌的回收率。4.具体操作方法4.1

2、.供试液制备：取防风通圣胶囊10g,加pH7.0无菌氯化钠■蛋白H东缓冲液100ml,振摇溶解，作为410的供试液，再用上述稀释液稀释成1：102、1：103、1：104三个稀释级，备用。4.2菌液制备(1)接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至80ml营养肉汤培养基中，培养18-24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液分别稀释至10-5>10-5>10-6,制成lml含菌数为50-100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。(2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至80ml改良马丁培养基中，lOOrpm振荡培养1&24小时，用0.9%无菌氯

3、化钠溶液稀释至10-6,制成lml含菌数为50-100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。（3）取25°C培养5-7天的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加15ml0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孑包子。吸取出1ml抱子悬液，然后用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-6,制成每lml含菌数为50-100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。4.3细菌、霉菌、酵母菌平皿法计数验证（1）试验组平皿法计数，分别取试验用的1：103>1：104供试液lml和lml含50-100cfu试验菌（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌）的菌悬液，分别注入平皿中，立即倾注营

4、养琼脂培养基，35.8°C,48小时培养；分别取试验用的10、1：102供试液lml和lml含50-100cfu试验菌（白色念珠菌、黑曲霉）的菌悬液，分别注入平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，25.5°C,72小时培养。每株试验菌平行制备2个平1111,观察并记录菌落数，菌落计数见表1。表1试验组菌落计数（cfu/ml）药品批号大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽泡杆菌白色念珠菌黑曲霉10・410-310-410-310-410-110-210-11010-2-308061699；10385；9184；8769；7163；6758；5977；84

5、65；7071；7663；7108061676；8364；6992；9584；8965；7057；6379；8171；7575；8175；7608061672；7568；7380；8575；7775；8169；7459；6560；6384；8581；87(2)菌液组平皿法计数，取lml含50-100cfu试验菌(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽鞄杆菌、白色念珠菌、黑曲霉)的菌悬液，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，其中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌倾注营养琼脂培养基，35・8°C,48小时培养；白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼脂

6、培养基，25・5°C,72小时培养。每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加试验菌数，观察并记录菌落数，菌落计数见表2。表2菌液组菌落计数(cfu/ml)药品批号大肠埃希菌金黄色葡萄球菌77；8395；9772；81枯草芽抱杆菌61；5862；6770；78白色念珠菌67；7375；8058；63黑曲霉73；8274；7783；8908061608061608061685；8976；8070；76(2)供试品对照组収规定量供试液测定供试品本底菌数，取1：103、1：104防风通圣胶囊供试液lml,加入平皿中，立即倾注营养琼脂培养基,35.8°C培

7、养48小时；取1：10、1：102防风通圣胶囊供试液lml,加入平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，25.5°C培养72小时，每个稀释级供试液平行制备2个平皿，观察并记录结果。菌落计数见表3。表3供试品对照组菌落计数（cfu/ml）药品批号大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽范杆菌白色念珠菌黑曲霉10-410-310-410-310-410-110-210-11010■2-308061611；60；111；60；111；60；17；90；17；90；10806168；50；18；50；18；50；15；50；15；50；10806165；50；15

8、；50；15；50；17；10；17；10；1回收率计算：回收率二试验组平均菌落数供试品对照组平均菌落数xlOO%菌液组平均菌落数试验组菌的回收率见表4。表4试验组