醋酸纤维素薄膜电泳

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1、血清蛋白质的醋酸纤维素薄膜电泳实验目的1．掌握电泳的基本原理，了解电泳仪和电泳槽的功能。2．熟悉电泳的基本过程与操作方法。电泳实验原理优点:快速、准确、重现性好。应用:1.分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等；2.分析某种物质的纯度及分子量。对生物大分子而言：电场力:F=QE阻力:F’=6πrηυ当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动:F=F’QE=6πrην迁移率:即ν/E，表示单位电场强度时粒子运动的速度。该值在一定条件下决定于粒子本身的性质，即其所带电荷、大小和形状.6πrηQE=ν影响电泳速度的因素样品本身：带电量、分子大小、形状电场强度：电压缓冲液：成分、pH、离子强度(0.02-0.2

2、M)支持介质：电渗作用、吸附作用温度负极正极－－－－－－－－－－－－－－－－表面带负电荷带正电荷的水层携带粒子向负极移动如果样品应移向负极，则泳动速度加快；如果样品应移向正极，则泳动速度减慢。＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋显微电泳等电聚焦电泳等速电泳密度梯度电泳电泳自由电泳(无支持体)区带电泳(有支持体)滤纸电泳(常压及高压)薄层电泳(薄膜及薄板)凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺)分类水平电泳槽垂直板电泳槽圆盘电泳槽双向电泳醋酸纤维薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为支持物。1.样品吸附极少，无拖尾现象，条带清晰。2.快速省时。3.灵敏度高，样品用量少。4.制成透明干膜用于

3、定量扫描分析与长期保存。5.操作简单、快速、价廉.醋酸纤维素是纤维素的醋酸酯，将其溶于丙酮等有机溶液中，可涂布成均一细密的微孔薄膜。待有机溶剂挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。染色方法氨基黑10B考马斯亮蓝R250银染色法考马斯亮蓝R250考马斯亮蓝G250人血浆蛋白质的等电点及迁移率蛋白质名称等电点泳动度/(cm2·V-1·S-1)分子量白蛋白4.88-5.9×10-569,000α1-球蛋白5.06–5.1×10-5200,000α2-球蛋白5.06–4.1×10-5300,000β-球蛋白5.12-2

4、.8×10-59,000-150,000γ-球蛋白6.85-7.50-1.0×10-5156,000-300,000病名白蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白肾病↓↓↑↑↑↑↓弥温性肝损害↓↓↑↓↓↑肝硬化↓↓↓↓β-γ桥原发性肝癌↓↓AFP↑多发性骨髓瘤↑↑↑慢性炎症↓↑↑↑妊娠↓↑↓无丙种球蛋白血症↓↓双白蛋白血症双峰实验器材和试剂实验器材电泳槽、电泳仪、染缸、滤纸、醋酸纤维素薄膜、点样器试剂1.血清2.巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6、I=0.06)3.染色液:氨基黑10B0.25g，甲醇50mL+冰醋酸10mL+水40mL溶解(可重复使用)4.漂洗液：甲醇45mL+冰醋酸5mL+

5、蒸馏水50mL实验步骤1.点样面为不光滑面，勿用手触摸；2.点样量适中，垂直居中点样；3.点样端靠近电泳仪负极；4.膜条背面朝上放置，需与滤纸贴紧，拉直。注意事项思考题分析影响电泳的各个因素。分析自己的实验结果，针对本实验的各项操作提出改进意见。