卫悦可益生菌分享：幽门螺杆菌免疫学检查

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1、幽门螺杆菌免疫学检查是通过测定血清中的幽门螺旋杆菌抗体来检测幽门螺旋杆菌感染，包括补被动血凝测定、免疫印迹技术和酶联合吸附测定（ELISA）等。幽门螺旋杆菌的免疫学检测正常值：结果为阴性。幽门螺旋杆菌的免疫学检测临床意义：片常结果：1.被检血清凝集滴度低于抗原対照4倍两孔或4倍以上为阳性°恢复期血清抗原滴度比急性期高4倍或4倍以上判为阳性。2.有特姝显色反应，证明有某种蛋白质存在.3.待检血清与已知阴性血清的比值（P/N&2.1,而且待检血清的0D值＞0.4,则判为阳性。需要检查人群：消化道溃疡患者。幽门螺

2、旋杆菌的免疫学检测注意事项：检查前禁忌：注意保护好脑部;准备好各种包装液，并配置好浓度。检查时禁忌：1.患者取脑脊液坐好，以免弄伤头部。2所川单克隆抗体致敏羊血红细胞要冻十才使川。3—抗、二抗的稀释度、作川时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。4.显色液必须新鲜配置使川，授后加入H202o5.DAB冇致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。6.严格控制影响标记效率的因素如温度、时间、凶、酶和抗体量等。7.装层析柱时要使柱体均匀、柱面平整，无气泡、裂隙。幽门螺旋杆菌的免疫学检测检查过程：一、被动血凝测定患

3、者刺収脑脊液，采用稀释抗原固定血清法用96孔V型微量血凝板，将乙脑抗原作倍比稀释,使每孔含25uL,被检血清用稀释液作1：10稀释,每孔加人25uL产,再滴加冻干乙脑单克隆抗体致敏羊血红细胞25uL,37°C下放置数小时后观察结果。二、免疫印迹技术（一）蛋白质样品获得：细菌诱导表达示，可通过电泳上样缓冲液盲•接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-lmino然后4°C,13,000g离心15min0取上清液作为样品。（二）电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGEo（三）转移：（半干式转

4、移）1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5minX3次。2、膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，浸入转膜缓冲液中lOmino3、转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压500g重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源，恒流lmA/cm2,转移1.5hc转移结束后，断开电源将膜取出，割取待测膜条做免疫卬迹。将有蛋白标准的条带染色，放入膜染色液屮50s示，在50%甲醇屮多次脱色，至背景

5、清晰，然后用双蒸水洗，风干夹于两层滤纸中保存，留与显色结果作对比。（四）免疫反应：1、用0.01MPBS洗膜,5minX3次。2、加入包被液，平稳摇动，室温2hc3、弃包被液，用0.01MPBS洗膜，5minX3次。4、加入一抗（按合适稀释比例用0.01MPBS稀释，液体必须覆盖膜的全部），4°C放置12hr以上。阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同。5、弃一抗和1%BSA,用0.01MPBS分别洗膜，5minX4次。6、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗（按合适稀释比例用0.01MPBS释），平

6、稳摇动，室温2hr。7、弃二抗,用0.01MPBS洗膜,5minX4次。8、加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水屮终止反应。三、酚联合吸附测定常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特界抗体。1•间接ELISA本法主要用于检测抗体。间接ELISA的操作程序如下。（1）材料①包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；②DVH包被抗原、酚标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清.③ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。（2）方法步骤①加抗原包被一4°C过夜，洗涤三次、抛干

7、②加待检血清一37°C2小时，洗涤三次、抛干③加酶标抗体一37°C2小时，洗涤三次、抛干①加底物液一37°C30分钟，加终止液②用ELISA检测仪测定0D值，并计算IIIP/N比值。2.双抗体夹心ELISA本法主要用于检测大分子抗原。①加抗体包被一4°C过夜，洗涤三次、抛干②加待检抗原-③加酶标抗体-④加底物液Tf37°C30分钟，洗涤三次、抛干-37°C30分钟，洗涤三次、抛干•37°C15分钟，加终止液⑤用ELISA检测仪测定0D值。幽门螺旋杆菌的免疫学检测一般费用:45元