β淀粉样蛋白人源性抗体的制备

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1、生技术通讯LETrERSINB10TECHNOLOGYvVo，l．·⋯21No．·5)一5ep．·，20106811TTHdoi：10．3969~．issn．1009—0002．2010．05．019研究报告l3淀粉样蛋白人源性抗体的制备孙超，常红艳，王双，林建波，俞炜源，陈燕侠1．军事医学科学院生物_Y-程研究所，北京100071；2．空军总医院高干科，北京100142[摘要]目的：应用噬菌体展示及抗体库技术，制备并鉴定13淀粉样蛋白(AI3)人源性抗体。方法：应用固相筛选方法，以人s-合成的A131—15肽为靶标分子，在大容量全合成人源性噬菌体抗体库中筛选抗AI3人源性抗体，并进行特异性

2、鉴定。结果：经过3轮筛选，单克隆鉴定获得噬菌体抗体F11，竞争性ELISA表明抗体对A131-42的结合位点位于115氨基酸残基内，ELISA结果证实抗体特异性良好。结论：以A131—15肽为靶标分子获得了特异性良好的人源性抗体。[关键词】阿尔茨海默病；B淀粉样蛋白；噬菌体抗体筛选；特异性[中图分类号]R392．1；Q52【文献标识码]A[文章编号]1009—0002(2010)05—068l一05PreparationandIdentificationofHumanAnti-AmyloidBPeptideMonoclonalAntibodiesSUNChao，CHANGHong-Yanl,

3、WANGShuang，，^fJian-Bo，YUWei-Yuanl,CHENYan-Xia21．BeijingInstituteofBiotechnology，Beijing100071；2．CadreWardGeneralHospitalofAirForce，Beijing100142；China[Abstract]Objective：Topreparationanti-amyloidppeptide(A13)antibodiesfromhumanphagedisplayantibodylibrary．Methods：A131-15peptidewasusedforscreeningspe

4、cificantibodiesfromalargefullysynthetichumanantibodylibrarybysolidpanning．TheantigenbindingactivityandspecificityofantibodyweredeterminedbyELISA，Results：After3roundsofpanning，onecandidate(F11)wasobt~ned．TheepitopewaslocatedwithinA131-15，andthespecificityofF11wasshowntobeexcellentbothinphage-antibod

5、ylevelandwholeantibodylevelbyELISA．Conclusion：Humananti-A131-15specificityantibodiescanbeisolatedfromphageantibodyli—brary．[Keywords]Alzheimerdisease；amyloidppeptide；phagedisplayscreening；specificity阿尔茨海默病(AlzheimerSdisease，AD)是一种能够引起细胞免疫反应，诱发脑膜炎p卅，因此，目前以记忆减退、认知障碍为主要特征的中枢神经系统对于抗AI3治疗性抗体的研究主要集中于包含B细

6、退行性疾病。其主要的病理学特征是脑内的细胞外胞表位的A8的N端。我们应用噬菌体表面展示及p淀粉样蛋白(amyloidppeptide，AI3)的沉积导致抗体库技术，对人工合成的A[31—15肽进行了人源的老年斑、神经纤维缠结和神经元细胞的缺失营养性抗体的筛选和鉴定工作，期望为研究AD的免疫坏死，因此淀粉样蛋白在脑中的沉着对AD的发病治疗奠定基础。起着关键作用。A13一般由40—42个氨基酸残基组成，是p淀粉样前体蛋白(p—amyloidprecursor1材料与方法protein，APP)的代谢产物，是经过p一和^y一分泌酶(secretase)的共同剪切作用形成的，是一种正常的1．1材料新

7、陈代谢产物。其中Apl一40占Ap总数的90％左全抗体重链表达载体H293、轻链表达载体右，At31—42约占10％，但目前认为AB1—42肽是构L293一CL及全合成人源性噬菌体抗体库均由本实验成老年斑的基本成分，是治疗AD的有效的靶标分子【1-2]。研究表明，制备抗Ap人源性抗体是治疗AD[收稿日期]2010—03～25[作者简介]孙超(1983一)，男，硕士研究生的有效手段，但Ap的C端被认为包含T细胞