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时间:2019-11-23
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1、生技术通讯LETrERSINB10TECHNOLOGYvVo,l.·⋯21No.·5)一5ep.·,20106811TTHdoi:10.3969~.issn.1009—0002.2010.05.019研究报告l3淀粉样蛋白人源性抗体的制备孙超,常红艳,王双,林建波,俞炜源,陈燕侠1.军事医学科学院生物_Y-程研究所,北京100071;2.空军总医院高干科,北京100142[摘要]目的:应用噬菌体展示及抗体库技术,制备并鉴定13淀粉样蛋白(AI3)人源性抗体。方法:应用固相筛选方法,以人s-合成的A131—15肽为靶标分子,在大容量全合成人源性噬菌体抗体库中筛选抗AI3人源性抗体,并进行特异性
2、鉴定。结果:经过3轮筛选,单克隆鉴定获得噬菌体抗体F11,竞争性ELISA表明抗体对A131-42的结合位点位于115氨基酸残基内,ELISA结果证实抗体特异性良好。结论:以A131—15肽为靶标分子获得了特异性良好的人源性抗体。[关键词】阿尔茨海默病;B淀粉样蛋白;噬菌体抗体筛选;特异性[中图分类号]R392.1;Q52【文献标识码]A[文章编号]1009—0002(2010)05—068l一05PreparationandIdentificationofHumanAnti-AmyloidBPeptideMonoclonalAntibodiesSUNChao,CHANGHong-Yanl,
3、WANGShuang,,^fJian-Bo,YUWei-Yuanl,CHENYan-Xia21.BeijingInstituteofBiotechnology,Beijing100071;2.CadreWardGeneralHospitalofAirForce,Beijing100142;China[Abstract]Objective:Topreparationanti-amyloidppeptide(A13)antibodiesfromhumanphagedisplayantibodylibrary.Methods:A131-15peptidewasusedforscreeningspe
4、cificantibodiesfromalargefullysynthetichumanantibodylibrarybysolidpanning.TheantigenbindingactivityandspecificityofantibodyweredeterminedbyELISA,Results:After3roundsofpanning,onecandidate(F11)wasobt~ned.TheepitopewaslocatedwithinA131-15,andthespecificityofF11wasshowntobeexcellentbothinphage-antibod
5、ylevelandwholeantibodylevelbyELISA.Conclusion:Humananti-A131-15specificityantibodiescanbeisolatedfromphageantibodyli—brary.[Keywords]Alzheimerdisease;amyloidppeptide;phagedisplayscreening;specificity阿尔茨海默病(AlzheimerSdisease,AD)是一种能够引起细胞免疫反应,诱发脑膜炎p卅,因此,目前以记忆减退、认知障碍为主要特征的中枢神经系统对于抗AI3治疗性抗体的研究主要集中于包含B细
6、退行性疾病。其主要的病理学特征是脑内的细胞外胞表位的A8的N端。我们应用噬菌体表面展示及p淀粉样蛋白(amyloidppeptide,AI3)的沉积导致抗体库技术,对人工合成的A[31—15肽进行了人源的老年斑、神经纤维缠结和神经元细胞的缺失营养性抗体的筛选和鉴定工作,期望为研究AD的免疫坏死,因此淀粉样蛋白在脑中的沉着对AD的发病治疗奠定基础。起着关键作用。A13一般由40—42个氨基酸残基组成,是p淀粉样前体蛋白(p—amyloidprecursor1材料与方法protein,APP)的代谢产物,是经过p一和^y一分泌酶(secretase)的共同剪切作用形成的,是一种正常的1.1材料新
7、陈代谢产物。其中Apl一40占Ap总数的90%左全抗体重链表达载体H293、轻链表达载体右,At31—42约占10%,但目前认为AB1—42肽是构L293一CL及全合成人源性噬菌体抗体库均由本实验成老年斑的基本成分,是治疗AD的有效的靶标分子【1-2]。研究表明,制备抗Ap人源性抗体是治疗AD[收稿日期]2010—03~25[作者简介]孙超(1983一),男,硕士研究生的有效手段,但Ap的C端被认为包含T细胞
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