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《生姜蛋白酶的双水相萃取纯化技术研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、山东农业大学硕士学位论文生姜蛋白酶的双水相萃取纯化技术研究姓名：谢芳中请学位级别：硕士专业：农学指导教师：唐晓珍2011-05-10摘要本研究以生姜为原料，于2009-2011年在山东农业大学食品科学与工程学院功能食品研究室进行，主要研究了运用双水相萃取技术(ATPE)分离提取生姜屮生姜蛋口酶的提取条件，分析了双水相成相I大I素对生姜蛋门酶萃取的影响，利用该技术得到了生姜蛋片酶的等屯点及三步双水相萃取纯化生姜蛋片酶的流程。主耍结果如下：1.单盐双水和体系的建立最佳PEG分子量为4000,PEG浓度为30%,选择盐种类为硫酸镀，浓度为10%,体系pH为8
2、.0,操作温度选择室温，样品加入量为3mLo此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高，分别可达87.24%和1.85。2.缓冲盐双水相体系的建立最佳PEG分子量为4000,PEG浓度为20%,缓冲盐pH为6.5,缓冲盐浓度为10%,此双水相体系的上相酶活冋收和纯化倍数都最高，分别达94.99%和1.86。3.PEG/(NH4)2SO4双水相体系及PEG/(NaH2PO「Na2HPO4)双水相体系的各相平衡关系的线性方程各分子量PEG/(NH4)2SO4相平衡关系的线性方程分别为:y=613.33e-°-2B9x；y=260.66e-°-2
3、036x；y=178.46e'01969x；y=79.91e0174x；y=124.52e'°-2492x；y=282.31eo.43O2x。各分子量peg/(NaH2PO4-Na2HPO4)ffl平衡关系的线性方程分别为：y=327.41e*°-2706x:y=170.9e-°-247x:y=105.9e-°-2508x；尸91.385严°那;y=i06.04e-°-4173x；y=73.272e03836x。4.交错分配法(crosspartitioning)测定生姜蛋白酶的等电点邙I)通过交错分配法测定生姜蛋门酶的等电点，得出生姜蛋门酶的等电点有
4、两个：即4.1和6.4,说明生姜蛋白嗨含有两个组分而且属于酸性蛋白嗨。5.三步双水相萃取捉取和纯化生姜蛋白酶流程的建立建立了三步双水相萃取提取和纯化生姜蛋口酶的流程，其中第二步萃取加入的盐浓度为20%,量为10mL,第三步萃取加入的盐浓度为12%,量为15mLo6.双水相纯化蛋白效果检测生姜蛋口酶粗酶液通过分子筛层析SephadexG-50后，得到两个蛋口峰，双水相萃取酶液仅得到一个蛋白峰，对所得蛋白峰测定英酶活，结果与粗酶液所得酶活相比酶活损失不大。关键词:牛•姜蛋白酶的双水和萃取纯化技术研究双水相萃取；生姜蛋白酶；交错分配法；三步萃取Abstrac
5、tTheresearchwasconductedwithgingerinShandongAgriculturalUniversityduringtheyearof2009to2011.ExtractiontechnologyofgingerproteasebyAqueousTwo-phaseSystemwasstudied・Andtheeffectsofextractionconditionsonpartitioningofgingerproteasewereanalyzed.Theisoelectricpointofgingerproteaseand
6、athree-stepprocessofAqueousTwo-phaseextractionandpurificationwereobtainedtouseofthetechnology.Themainresultsareasfollows:1・EstablishmentofsinglesaltAqueoustwo-phaseextractionsystemTheopticalsinglesaltAqueousTwo-phaseextractionfactorsare:theoptimumPEGmolecularweightwas4000,PEGcon
7、centrationwas30%,sortofsaltswas(NH4)2SC)4,(NH4)2SC)4concentrationwas10%,pHofsystemwas8.0,operationtemperaturewasroomtemperature,concentrationofelectrolyte(NaCl)was2%andthesampleaddingtothesystemwas3mL・Undertheaboveextractionconditions,theGPactivityrecoveryandpurificationfactorof
8、topphaseinaqueoustwo-phasesystemreachedmaximums
