双水相萃取实验

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1、一、双水相系统的相图绘制1•实验目的了解制作双水相系统的相图的方法，加深对相图的认识。实验原理相图是研究两水相萃取的基础，双水相形成条件和定量关系常用相图來表示。图1是典型的高聚物-高聚物-水双水相体系的肓角坐标相图，两种聚合物A、B以适当比例溶于水就会分别形成有不同组成、度的两相，上相组成用T点表示,下相组成用B点表示，由图1可知上下相所含高聚物有所偏重，上相主要含B,下相主要含A。曲线TCB称为结线，宜线TMB称为系线。结线上方是两相区，下方为单相区，若配比取在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为混浊。组成

2、在系线上的点，分为两相后，其上下相组成分别为T和B,T、B量的多少服从相图的杠杆定律。即T和B相质量之比等丁系线上MB与MT的线段长度之比。又由于两相密度相差很小，故上下相体积之比也近似等于系线上MB与MT线段长度之比。图1A-B-水双水相体系相图Figure1ThephasediagramoftheA"B-H20aqueoustwo-phasesystem实验器材和试剂（1）器材：电子台秤，漩涡混合器，大试管，滴定管，密度计，温度计。（2）试剂：聚乙二醇，硫酸鞍，硫酸镁。操作方法（1）溶液的配制配制40%的盐

3、（硫酸鞍或硫酸镁）溶液配制40%的聚乙二醇溶液，液体聚乙二醇可用纯溶液。（2）相图的制作精确称取一定质量（0.7000g左右）PEG溶液于大试管中，按表1所列第1列数据，加入0・5n±去离了水，用滴定管缓慢滴加已配好的40%的盐溶液，并不断在漩涡混合器上混合，观察溶液的澄清程度，直至试管内液体出现浑浊为止。记录盐溶液的加量@）。然后，按表格所列第2列数据加入水，溶液澄清，继续向试管中滴加盐溶液并不断混匀，直至再次达到浑浊，如此反复操作。计算每次达到浑浊时，PEG和盐在系统总量中的质量分数，将实验数据填入表中，以

4、PEG的质量分数为纵坐标，某种盐的质量分数为横坐标作图，即得到一条双节线的相图。表1相图制作表编号水/§(NlASQi溶液加量/g纯(NH4)2S04累计量/g溶液累计总量/g(NH4)2S04质量分数/%PEG质量分数/%10.53.13150.8954.378620.44.7920.32.17921.51865.951121.853.0230.32.04562.19.286722.652.2640.33.13723.012.673823.681.6550.56.07694.719.327624.521.08

5、60.56.19096.526.013825.020.870.56.85858.533.459625.320.62根拯以上数据以（XH.）2SO4质量分数为横坐标，以PEG质量分数为纵坐标即可做出相图。PEG4OOO与MgSO4双水和图v=0.0995x2-5・3887x+73.334二、双水相系统比例的选择根据相图，选择五个成相比例。三、蛋白酶酶活标准曲线的绘制一一Folin酚法或紫外分光光度法紫外分光光度法测蛋白酶酶活1.原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水

6、解的酪索沉淀除去，滤液对紫外光冇吸收，可用紫外分光光度法测定。根据吸光度计算其酶活力。酶活单位的定义：每lmL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，lmin水解酪素产生lug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。2.试剂和溶液2.1三氯乙酸c=0.4mol/L：称取三氯乙酸65.4g,用水溶解并定容至1000mL。2.2氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L2.3盐酸溶液c（HC1）=1mol/L及0.1mol/Llmol/LHC1:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中,定容至lOOOmLo0.lmol/L

7、HC1：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中,定容至1000mLo2.4缓冲溶液磷酸缓冲液（pH=7.5）适用丁•中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HP04•12H20）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2P04•12H20）0.5g,加水溶解并定容至lOOOmLo乳酸缓冲液（pH=3・0）适用丁酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80%〜90%）10.6g,加水溶解并定容至1000mLo乙液称取乳酸钠（70%）16g,加水溶解并定容至1000mLo使用溶液取甲液8mL,加乙液1mb,混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液

8、。硼酸缓冲溶液（pH=10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g,加水溶解并定容至1000mLo乙液称取氢氧化钠4.0g,加水溶解并定容至1000mLo使用溶液取甲液500ml八乙液400mL混匀，用水稀释至1000mLo上述各种缓冲溶液，均须用pH计校正。2.510g/L酪索溶液称取酪素1.000g,精确至0.001g,用少量0.5mol/L氢氧化钠溶液（若酸性蛋片