实验三 双水相萃取茶叶中茶多酚

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1、实验三双水相萃取茶叶中茶多酚一、实验目的掌握双水相萃取的原理及其萃取茶多酚的操作二、实验原理双水相萃取技术是指把两种聚合物或一种聚合物与一种盐的水溶液混合在一起,由于聚合物与聚合物之间或聚合物与盐之间的不相溶性形成两相，溶质(包括蛋白质等大分子物质、稀有金属以及贵金属的络合物、中草药成分等)在双水相体系中服从Nernst分配定律。因此双水相萃取在生物工程、药物分析、金属分离和分离环境污染物等方面具有广泛的应用。茶多酚又叫茶单宁，是茶叶中多酚类物质的总称，具有很强的抗氧化和捕获自由基作用，是许多中草药的有效成分。开展茶叶的

2、综合利用，尤其是利用低档茶叶或茶叶加工的下脚料来生产高附加值茶多酚的研究成为国内外开发“绿色工程”的热门课题之一。提取茶多酚的主要方法有溶剂萃取法、树脂吸附分离法、离子沉淀法、超声波浸提法、超临界流体萃取法、微波浸提法等。双水相萃取依据组分在两相间的选择性分配实现目标成分的分离，因其萃取分离过程条件温和，可调节因素多，易于放大和操作，特别适用于生物物质的分离和提纯。有研究表明异丙醇、乙醇等低成本的普通有机物与无机盐和水以适当浓度混合时，也能形成双水相体系。茶多酚在乙醇/磷酸氢二钾双水相体系的上下相中的不同分配情况，茶多酚

3、在上相中富集，这样由于茶多酚上下相中含量的差异，可以获得较高茶多酚萃取率。三、实验用品1.仪器：250mL烧杯；1mL移液管；25mL容量瓶；玻璃棒；恒温水浴锅；50mL带盖离心管；离心机；电子天平；紫外可见分光光度计。2.试剂：绿茶；无水乙醇；酒石酸钾钠；磷酸二氢钾；磷酸氢二钾；硫酸亚铁。四、实验方法1.配置溶液：1.1酒石酸亚铁溶液：称取1g(准确至0.0001)硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠(准确至0.0001)，用水溶解并定容至1L(低温保存，有效期10天)。1.2pH为7.5的磷酸缓冲溶液：取磷酸二氢钾1.36g，加

4、0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。2.茶多酚粗提液的制备称取20g茶叶放入烧杯中，加入200mL的蒸馏水，搅拌下开始加热，温度达到80度时保持30min，放置至室温备用。3.双水相体系的建立取10mL的茶叶提取液，加入到10mL配置好的80%乙醇与磷酸氢二钾水溶液(0.33g/mL)的双水相溶液中，摇匀后离心，静置观察分相情况。4.茶多酚的检测采用酒石酸亚铁法(国标GB8313-87)定量分析茶多酚的上相(富含乙醇水相)提取液，萃取体系中的C2H5OH和磷酸氢二钾对测定结果的干扰很小。4.

5、1分相后上相中茶多酚的吸光度准确吸取1.0mL分相后上相溶液，加入到25mL的容量瓶中，然后依次加入4mL的蒸馏水和5mL的酒石酸亚铁溶液，充分混合后，加入磷酸缓冲溶液摇匀定容。用10mm的比色皿，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定溶液的吸光度。测定两次，取平均值。4.2分相前提取液中茶多酚的吸光度方法同操作3和4.1，测定两次，取平均值。5.萃取率的计算萃取率=分相后上相中茶多酚的吸光度/分相前提取液中茶多酚的吸光度六、思考题1.双水相萃取的原理是什么？2.萃取时间的延长，对茶多酚的萃取率有什么影响？