张翠霞毕业论文

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1、摘要水稻是世界上最重耍的粮食作物Z-,为约40%的人口捉供了主要食粮。虫害是造成水稻减产减收的主要原因Z-O水稻虫害种类繁多，我国每年因虫害造成的产量损失占到水稻总产量的5%以上，给水稻的生产带来了极大危害。目前，我国控制水稻虫害最主要的方法是使用化学杀虫剂，但化学防治带来一系列问题，如环境污染,生产成本提高和食用安全性降低等。因此，通过培育口身能够抵抗虫害的水稻品种来防治水稻虫害无疑是最经济安全的冇效策略。从已冇的研究来看，仅依靠常规育种难以解决抗虫种质资源稀缺的问题，因此，通过基因工程手段导入外源抗虫基因，进而培育抗虫转基因水稻越來越受到人们的重视。近年来转Bt基因

2、抗虫水稻已经在生产上得到了广泛的应用，随着抗虫转基因水稻的大规模种植，Bt基因抗虫谱相对狭窄及害虫易产生耐受性等问题相继引起了人们的关注。因此，从自然界中分离克隆岀更多、更冇效的基因成为解决这些问题的方法Z—。制稻是亚洲栽培稻的重要亚种，全世界水稻栽培品种中冇80%以上属于制稻，其组织培养研究具有重要意义。而制稻的组培特性普遍较差，再牛率很低，导致一些生产上应用价值较大的优良晶种转化仍然难以成功或转化频率低，因而研究优质釉稻的愈伤组织形成和植株再生能力对丁遗传转化率捉高十分必耍。农杆菌介导法因具有转化拷贝数低等独特的优势，而广泛应用于转基因抗虫水稻研究中。然而，水稻不同

3、品种间遗传差异性比较人，11转化反应对水稻基因型依赖性强，从而增加了农杆菌介导的水稻遗传转化的复杂性和随机性。因此，通过对农杆菌介导的水稻转化休系的优化提高转化率十分必要。本研究主要进行了以下方而的工作：1.在新型Bt基因Cry30Fal和刃序列的两端分别增加酶切位点序列，送基因合成公司合成，然后将目的基因片段与中间克隆载体pUPROK分别进行双IW切，连接，获得含口的基因的屮间载体。测序鉴定得到序列正确的阳性载体，用内切酶切下目的基因片段并插pCDMAR-Hyg载体，最终获得高效表达双元载体pCDMAR-Cry30Fa1-Hyg与pCDMA^C^54Aal-Hyg,并

4、通过酶切和测序的方法鉴定出上述载体的止确性。2.通过对愈伤组织继代次数与继代培养基中加入抗坏血酸（Vc）浓度的优化，调整愈伤组织生长状态，提高胚性愈伤组织数量。结果表明R125与R818的愈伤组织继代2・3次，分化率最高；继代培养基中加入Vc浓度为40mg/L,能减少愈伤组织褐化率月•对英分化能力无影响。1.通过对洗菌后及分化前愈伤组织的干燥处理，改良农杆菌介导的水稻遗传转化体系。结果表明洗菌后进行干燥及分化前愈伤组织在滤纸上干燥2天，能够加快分化速度，提高分化率。2.农杆菌介导法将外源基因Cry30Fa1与Cvy54al转入三系恢复系R125与R818屮，通过PCR

5、检测与潮霉素溶液检测转基因植株。结果表明Cry3OFal与Cry54Aal转R125未获得转基因阳性植株；Cry54Aal转R818也未获得转基因阳性植株；Cry30Fcil转R818共获得233株转基因再生植株，经过潮霉索溶液检测和分子检测，其中46株为含目的基因的阳性植株。关键词：釉稻；Cry30Fal基因；Cry54Aal基因；抗虫；农杆菌介导法AbstractRiceisoneofthemostimportantgraincropsintheworld,forabout40%oftheworld'spopulationtakingitastheirstaplef

6、ood.However,insectdamageisoneofthemainreasonstodecreasethericeyield.TherearealargevarietyofricepestsinChina.Thericeproductionlossismorethan5%oftotalyieldbecauseofinsectdamage.Atpresent,themainmethodtocontrolricepestistoutilizechemicalpesticides・However,itcausedalotofproblems,suchasenviro

7、nmentalpollution,higherproductioncost,foodsafety,etc.Breedingnewricevarietiesthatproduceinsecticidalproteinsbythemselvesisundoubtedlythemosteconomicalandsecuritystrategy.Onthebasisofpreviousreports,itisdifficulttosolvetheproblembytraditionalbreedingbecauseofricegennplasni