微生物鉴定确认试验

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1、目录1.目的22.范围23.参考资料24.定义25.责任26・程丿于27.相关文件：88.相关记录:89.巾參订i己录:810.附件：81.目的本程序旨在阐明微生物实验结果的鉴別程序和操作规范，确保鉴別结果的准确性和可靠性。2.范围所有用于检测的以及在检测中发现的微牛物，包括细菌（需氧菌、厌氧菌）、酵母菌和霉菌。3.参考资料产品说明书4.定义不适用5.权责5.1QC主管有责任保证此程序的执行。5.2实验室所有微生物人员有责任严格按此程序执行。6.程序6.1方法分类微生物实验结果的鉴别方法分为：菌落形

2、态检查、显微镜检查、皋础生化试验鉴别、API鉴别。其中API是建立在生化鉴别试验基础上的一种简便、快捷的鉴别方式。6.2方法选择微牛物鉴别是微牛物实验室重要的步骤之一，同时也是物料释放的主要参考依据，因此微牛物鉴别方法的选择和具体的鉴别操作必须严格按照相应的标准操作程序执行，从而保证鉴别结果的可靠性。在无明确规定的情况下，首先应当依次进行菌落形态检査和显微镜检查以确认微生物的大类，然后根据初步确认结果选择合适的API系统进行鉴定，必要时进行基础生化试验鉴别以辅助确认微生物种类。6.3鉴别步骤6.3.

3、1菌落形态检查菌落形态检查主要采用肉眼直接对有形的菌落形态进行辨识，主要包括菌落大小、颜色、菌落表面光滑度和菌落外形等，必要时可以借助放大镜。6.3.2显微镜检查6.3.2.1划线分离图1分区划线法（左）及蘭落分布示盘图（右）将待鉴定微牛物从它牛长的培养基上分离成纯的、单细胞菌落以保证该菌种的纯度。/对于在检测中发现的未知微生物，采用无菌接种环或针挑取可疑菌落，用分区划线法（图1）在TSA或SDA或R2A平板上划线分离。TSA平板于30-35°C培养18-24小时；SDA平板于30-35°C或20-

4、25°C培养18-72小时；R2A平板于30-35°C培养18-24小时；若在上述培养时间内未能生长，可适当延长培养时间或更换培养基或采用厌氧培养。/对于用于检测的已知微生物，除特殊要求的以外，培养要求如下：・使用API鉴别，细菌接种在TSA平板上并于30-35°C培养18-24小时；酵母菌接种在SDA平板上并于30-35£或20-25°C培养18-72小时。1.1.1.2染色为了更好的在显微水平下对微生物的个体形态进行观察，适当的染色十分必要，适用的方法主要有革兰氏染色、芽抱染色和霉菌染色等。/镜

5、检的主耍内容包括微生物的细胞形状、大小和着色状况等。/细胞形状主耍冇杆菌（包括球杆菌、长杆菌和短杆菌等）、球菌（包括双球菌、荊萄球菌和链球菌等）、螺旋菌、弧菌、是否有抱子、酵母和霉菌等。/着色类别以革兰氏染色为例，主要有革兰氏阴性和革兰氏阳性等。1.1.2基础生化鉴别6.3.3.1过氧化氢酶试验/滴加过氧化氮酶至单个菌落上。/在60秒内出现气泡，表明结果为阳性，否则为阴性。6.3.3.2氧化酶试验/氧化酶试剂：滴加氧化酶试剂置单个菌落上。/氧化酶试剂条：挑取单个菌落置试剂条上。/在20秒内出现蓝黑色

6、，表明结果为阳性，否则为阴性。1.1.3API鉴别系统6.3.4.1API鉴别主要包括API20NE、API20E、APIStaph、API20Strep、API50CH等。有关各种API鉴别的方法参见相应的标准操作程序和使用说明书。6.3.4.2依据6.3.3.1〜6.3.3.2得出的待检菌落的初步鉴定结果，按照目标微生物的个体细胞形态分别进行鉴别，具体参见表1“微生物分类鉴别表”。6.3.4.3API鉴别流程参见"API鉴别系统试剂条选择流程图”。1.1.4微生物分类鉴别6.3.5.1分类鉴别表

7、表1：微生物分类鉴别表分类镜检形态基础生化实验APIVITEK2球菌球状，绝大多数为革兰氏染色阳性过氧化氢酶阳性APIStaphGP阴性APIStrep血琼脂生长APIStaph血浆凝固酶阳性APIStaph阴性APIStaph杆菌革兰氏染色阳性过氧化氢酶无抱了阳性APICorynoAPIListeriaANC阴性API50CHL有抱子,好氧过氧化氮酶阳性API50CHB/EBCL有泡子，厌氧N/AAPI20AANC革兰氏染色阴性无沦子，好氧氧化酶阳性API20NEGN阴性API20E酵母球型，细胞

8、体积明显大于细菌，革兰氏染色阳性N/AN/AAPICAUXYST635・2霉菌特征与分类表2霉菌特征与分类霉菌分类（属）菌落形态特征镜下形态特征毛霉菌落呈蔓延式牛长，但初期可成菌落状；菌落形态为稀疏絮状；菌丝体灰白色、灰褐色、色泽先出现于菌落中心。菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝，菌丝体上直接牛出抱囊梗，他子曩，无囊托。曲霉颜色是白灰色到黑色（黄色或橙色/绿色/褐色或似褐色）；有典型的曲霉菌头。分生砲子梗由一根直立的菌丝形成，菌丝的末端形成球状膨胀（顶囊），分