毛细管电泳甘油-盐基质辅助富集核酸的研究实验的研究

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1、本研究探讨了当廿油和盐同时在分析样品中存在时(不是在分离缓冲液中)，毛细管电泳分析核酸吋一种新的富集方法。采用含Ribogreen荧光染料的1xTBE作为毛细管电泳分离介质，研究检测了不同类型的核酸如RNA、双链DNA(dsDNA)、单链DNA(ssDNA)在毛细管电泳分析实验屮的富集效果。实验表明在高浓度的盐和超过50%浓度的廿油同时存在于样品基质中时，RNA在毛细管中的富集可以提高30倍，因此可以大大提高检测灵敏度和分离的分辨率。实验所用的荧光染料Ribogreen是一种可以对双链DNA、单链DNA、和RNA等核酸

2、都可以进行荧光染色的特种染料，含有该染料的lxTBE缓冲液可以用于毛细管电泳分析检测各种类型的核酸，同时该染料可以用普通的488nm氮离子激光来激发荧光，可以较容易实现核酸的高敏感度检测。因此，在整个实验屮我们使用了含有该染料的1xTBE缓冲液作为分离介质。在木研究屮还分析了盐和甘油同吋存在吋引起富集效果的可能原因。甘油对于富集影响的原因可能在于它能改变溶液中核酸链的构型，这己经有研究者通过激光动态光散射实验验证了。由于甘油的极性比水小，当甘油存在吋，核酸链之间的静电排斥作用增强，相互之间的距离增大。从而使溶液中的核酸

3、构型趋于一致。同时毛细管屮的样品，在电泳开始吋，可能有一个类似短暂的等速电泳(pseudo—tITP)过程，廿油在类似短暂等速电泳(pseudo—tITP)中可能发挥尾随电解质的作用。甘油和盐基质辅助核酸富集的作用使得在毛细管电泳分析屮，可以容许核酸样品中存在较高浓度的盐，可以免去样品的一些预处理过程，同时达到更高的检测敏感度和更高的核酸分离效率。因此对于核酸物质的毛细管电泳分离和测序等有着重要的实用前景。关键词：富集，LT油，盐，毛细管电泳，核酸AbstractThisworkreportedanewstacking

4、effectfornucleicacidssubjectedtocapillaryelectrophoresiswhenmixturesofglycerolandinorganicsaltswerepresentinthesample(notinseparationbuffer).DifferenttypesofnucleicacidsamplesincludingRNA,doublestrainDNA(dsDNA),aswellassinglestrainDNA(ssDNA),weretestedforthestac

5、kingeffects.Underhighconcentrationofsaltsandglycerol,theRNAsamplecouldbestackedashighas30times.Inthisreportwealsohavediscussedthereasonsforstaking.RibogreenisaspecialfluorescencedyethatcanstaindsDNA,ssDNAaswellasRNA.Inourrecenteffortstodevelopauniversalbuffersys

6、temforanalyzinginteractionsbetweennucleicacidswithproteinsbycapillaryzoneelectrophoresis,wefoundthat1xTBEbufferwithRibogrccncanbeusedforseparatingnucleicacids-proteincomplexandhighlysensitivedetectionofnucleicacidsbylaserinducedfluorescencewitha488nmArgonlaser(d

7、atanotshown).Therefore,thisbufferisusedthroughoutexperiments.Theroleofglycerolplayedforthestackingwasexplainedbasedonitsabilitytochangenucleicacidchains'conformationanditsserveasaterminatingionduringapseudo-transitisotachophoresis(ITP)step.Theglycerol-saltmatrix

8、willoffermoretolerancetosaltsinsamplematrix,higherdetectionsensitivityandhigherresolutionofnucleicacidsanalyzedbyCapillaryElectrophoresis.Thusthisglycerol-saltmatrixw