ω3多不饱和脂肪酸甘油酯富集的研究

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1、摘要摘要鱼油中CO．3多不饱和脂肪酸(co．3PUI’A)在人体中具有重要的生物学意义，其特征脂肪酸EPA和DHA的生理活性己经明确，EPA具有预防冠心病、降血压、消除疲劳、预防动脉粥样硬化和脑血栓、抗癌等生理活性，DHA能显著地促进婴儿的智力发育，改善大脑机能，提高记忆力，是生产预防心血管疾病和婴儿益智食品的良好基料。前期研究证明∞一3PUFA甘油酯产品在消化吸收和利用方面优于其乙酯和游离型产品，但天然鱼油中∞一3PUFA甘油酯的含量偏低，影响了产品的保健功效，为了提高产品中03—3PUFA甘油酯的纯度和浓度，提升产

2、品的功能保健价值，本文以甘油和鱼油经水解后分离纯化出来的∞．3PUFA为原料，通过脂肪酶在有机相中催化合成03．3PUFA甘油酯产品，达到富集∞．3PUFA甘油酯的目的。本论文首先对鱼油水解样中的∞．3PUFA(EPA、DHA)的分析检测和定量方法进行研究，并与国标气相色谱测定方法进行比较，确定了EPA、DHA的HPLC定量分析条件：色谱柱Sunfire．C18(5“m，250minx4．6mmi．d)；PDA检测波长205nm；流动相为甲醇．0．2％甲酸水溶液体系；洗脱方式为二元梯度洗脱；柱温35℃，进样量59L。然

3、后对鱼油的水解工艺以及水解后游离∞．3PUFA(EPA、DHA)的分离纯化进行研究，比较了化学水解和酶催化水解两种水解方式，发现化学水解在水解率和EPA、DHA得率上都优于酶水解，化学水解优化的工艺条件为：皂化时间60min，皂化温度50℃，乙醇／水比例(v／v)6：1；振荡频率150r／min，此条件下水解率为95．5％，EPA得率为91．2％，DHA得率为88．9％。鱼油水解后，利用C18柱对水解液进行层析分离纯化，适宜的分离条件为：流动相为甲醇／水，70％、80％、90％、100％甲醇梯度洗脱，流速2mL／min

4、，上样量为29鱼油水解液，每管10mL进行分部收集，并采用质谱检测对层析样品进行快速分析，利用HPLC检验EPA、DHA收集液的纯度，经分离纯化后EPA、DHA纯度分别达到92．9％和93．2％。随后利用甘油和分离纯化得到的EPA／DHA作为合成反应原料，对有机相脂肪酶催化合成∞．3PUFA甘油酯的间歇生产工艺进行了优化研究。通过单因素实验，确定了有机相脂肪酶催化合成EPA／DHA甘油酯的间歇反应最佳工艺条件：反应溶剂为正己烷，EPA／DHA的浓度为0．2mol／L，EPA／DHA与甘油摩尔比为3：1，分子筛添加在反应

5、进行了24h时，脂肪酶添加量为179／L，40℃振荡水浴反应48h，经反应合成后，EPA甘油酯的酯化率达到95％，其中甘油三酯含量达93．3％，DHA甘油酯的酯化率为94．5％，其中甘油三酯含量为93．2％，取得了较好的富集效果。通过质谱及1H-NMR、13C-NMR的检测，验证了合成产物EPA甘油三酯和DHA甘油三酯的结构。最后，为了提高化学合成效率，自行设计并组装了一个小型的连续化合成反应装置，初步研究了EPA／DHA甘油酯的连续化生产工艺，探讨了在连续化合成反应过程中脱水装置加入与否、EPA／DHA与甘油的摩尔比

6、、酶催化反应的温度、反应液在酶柱中的滞留时间等因素对产物生成的影响，结果表明，选用1，4．二氧六环溶剂，∞．3PUFA(EPA、DHA)甘油酯的连续化合成在反应温度45℃，EPA／DHA与甘油摩尔比为3：1，反应底物摘要在酶柱中滞留时间为2h的工艺条件下，EPA和DHA甘油酯的酯化率分别为31．4％和29．7％，甘油三酯含量分别为9．3％和8．8％。03．3PUFA甘油酯连续化合成反应的初步研究结果显示，连续化工艺尽管在反应效率上大幅度提高，对于工业化生产应用有一定参考价值，但是在如何提高甘油三酯产率问题还有待于进一步

7、研究。关键词：EPA、DHA；水解；EPA／DHA甘油酯；有机相酶催化合成；分离纯化AbstractItisbynowwellestablishedthatthepolyunsaturatedfattyacids佃-3PUFA)，especiallyeicosapentaenoic(EPA)，docosahexaenoic(DHA)acids，arebeneficialtohealth．EPAandDHAhavebeenrecognizedhavedifferentphysiologicalfunction．EPAwa

8、srecentlyshowntohavesuchhighlybeneficialeffectsaspreventingcoronaryheartdiseases，hypertriglyceridem，bloodplateletaggregationandloweringbloodcholesterol，thusreducingth