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1、过度运动导致大鼠肾组织TGF-B1变化探究作者简介：姚俊(1970-),男，湖南人，本科，助理研究员，研究方向运动生理、生化。摘要：通过在不同负荷的运动训练状态下，观察大鼠血清BUN.Ser.尿蛋白排泄率以及肾组织TGF-B1表达的变化,研究不同负荷的运动训练对大鼠肾组织结构、功能及肾组织TGF-B1表达的影响，以及揭示肾组织TGF-pl的表达对肾脏组织结构、功能变化及运动性蛋白尿产生的作用及机制。实验结果表明：综过8周过度训练后，大鼠血清BUN.Ser及尿TP排泄率显著升高(p<0.05),肾组织TGF-B1表达明显增加，表明过度训练造成肾小球及肾小
2、管超微结构的伤害，随着ECM过度堆积，发生肾间质纤维化，加剧肾单位的损害，导致肾小球滤过和肾小管重吸收功能的下降；提示过度训练导致肾组织TGF-B1表达的显著增加，是过度训练造成肾组织超微结构及功能损害的重要因素。关键词：血清BUN；Scr；尿TP；TGF-Bl；过度训练中图分类号：G804.23文献标识码：A文章编号：1007-3612(2006)05-0629-03本文通过在不同负荷的运动训练状态下，观察大鼠血清BUN、Set、尿蛋白排泄率以及肾组织TGF-B1表达的变化，研究不同负荷的运动训练对大鼠肾组织结构、功能及肾组织TGF-B1表达的影响，
3、以及揭示肾组织TGF-31的表达对肾脏组织结构、功能变化及运动性蛋白尿产生的作用及机制。1材料与方法1.1实验动物与喂养选用健康雄性Wistar大鼠36只，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物级别：二级,体重192〜271g,鼠龄3〜4个月，常规分笼喂养，自由饮水进食。动物室内温度21〜24°C,相对湿度45%〜60%,每天光照时约为7：00〜19：00o1.2实验方法1.2.1运动条件玻璃钢游泳地呈圆形，内壁光滑,直径45em,水深70em,超过大鼠身长的2倍，水温34〜36°C。1.2.2分组与训练方案大鼠购进后，先适应性喂养1周，然后按体重分层
4、，随机分为3组：1）对照组（A组）14只，常规喂养，不加干预，平时不运动。2）—般游泳训练组（B组）14只，每周训练6d,每天游泳训练1次。第1次下水游泳20min,此后逐日累加，至第1周末时游泳时间延长至每天lh,第2周末时每天游1.5h,此后维持这一运动量直至完成8周的游泳训练。3）过度训练组（C组）25只。前2周训练安排同B组，第3周末游泳时间增长到2h,第4周开始进行力竭性游泳训练；开始时大鼠尾部负重0.5%体重的重物，每天游2h,至周末增加到负体重1%的重量，第5周末增加到2%。从第6周起每至第8周训练结束，大鼠上、下午各训练1次，负3%体重
5、的重物游泳2h,对在短时间内力竭的大鼠(沉入水底10s不能回到水面)，捞出休息5min,然后继续再进行游泳训练，使训练时间至满2h。1.3取材制备与处理各运动组大训练满8周后，次日上午继续按第8周安排的训练方案训练。B组游完1.5h,C组大鼠负3%体重游完2h或游至力竭。A组和B、C组大鼠在完成游泳训练后即刻经腹腔注射2%戊巴比一生理盐水(5mL/ksBW)麻醉后，腹腔主动脉取全血2mL置于玻璃试管中，并立即低温离心分离血清(4°C,300rpm,10min),用于测定BUN、Ser。迅速打开腹腔，用4号针头和干燥针筒抽尽膀胱尿液，所取尿样精确定容后，
6、装入试管-20t冰箱保存,用于尿蛋白含量测定。同时取右肾，经0*生理盐水充分冲洗后称重，置于液氧中保存。以备肾脏组织TGF-B1表达的测定。取左肾4%戊二醛固定待作超微结构分析。1.4观察指标及方法1)血清BUN、Ser的测定在日立7179A全自动生化分析仪上完成。2)TP测定采用Perini测定法。排泄率采用ug/min表示[3]o3)肾脏组织TGF-2表达的测定采用Westernblot方法。肾组织总蛋白的提取采用RNA细胞裂解液，蛋白含量按改良Lowry法测定。取总蛋白50ug经15%SDS-PAGE凝胶电泳后，转移至硝酸纤维素膜上，用丽春红染色
7、观察转移效果并标出分子量标准。然后用含5%脱脂牛奶的TBST4工封闭过夜，洗膜后加入兔抗TGF-2多克隆抗体（1：100）进行杂交，再用HRP标记的羊抗兔IsCd：200）进行二抗杂交，最后加入免疫印迹化学发光试剂（购自华美生物工程公司）显影。杂交结果在LeicaQSOOIW图像分析系统中进行吸光度分析。肾组织超微结构检查：用日本产JEM-1200EX透射电镜观察超薄切片（X8000倍）肾小球基底膜的厚度，每张电镜切片随机选择8个包含肾小球基底膜的视野，观察基底膜厚度、系膜基质及足突变化情况，并摄像。1.5统计学处理实验结果数据均以均数土标准误（X+S
8、）表示，组间差异性比较采用方差分析、Q检验和T检验进行分析。先做齐性分析，查正态分布，不齐资料
