溶菌酶分离纯化的研究进展

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1、溶菌酶分离纯化的研究进展LUOYANGNORMALUNIVERSITY2011(届)生物丁程下游技术作业溶菌酶分离纯化的研究进展院(系)名称专业名称学学生姓名号生命科学系生物技术徐孝锋111344009完成时间2013年11月溶菌酶分离纯化的研究进展生命科学系生物技术徐孝锋111344009摘要对近年来最新的溶菌酶分离纯化的方法，如包折膜色谱法、离子交换法、双水相技术、反胶团萃取、膨胀床吸附法等进行了总结并对利川溶菌酶时存在的问题进行了分析总结，对溶菌酶的应用前景进行了展望。关键词溶菌酶；膜色谱法；分离；纯化；应川TheResearch

2、andApplicationofLysozymeAbstractInthisarticle,thestructure,properties,purification,activitymeasurementandrenaturationoflysozymearesummarized.Theapplicationoftheonzymeinfoodindustry,biologicalenginccringandmodicincisalsointroduced.Theencountcredproblemsinapplicationoflyso

3、zymearepointedout,andthepotentialforfurtherapplicationoflysozymeispredicted.KeywordsLysozyme；StructureandProperties；Applications；Purification；EnzymeActivity溶菌酶(Lysozyme)是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，又称细胞壁溶解酶，是一种糖昔水解酶，水解组成细菌细胞壁的N—乙瞅胞壁酸(NAM)和N一乙瞅萄糖胺(NAG)Z间的日一1,4糖昔键，广泛存在于自然界中[19]o1922

4、年州來明(F1eming)发现在人的唾液、眼汨中存在有溶解细菌细胞壁的酶，[]因具具有溶菌作用，故命名为溶菌酶4。它是一种无毒、无副作川的蛋门质，具有一定的溶菌作川，可作为食品防腐剂。同时它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理作用，可治疗出血、血疗、血痰和鼻炎等。1965年，英国的菲利普等用X衍射法対溶菌酶进行研究分析，第一个完全弄清了溶菌酶的立体结构［4］。溶菌-酶还具有破坏细胞壁结构的功能,因此溶菌酶成为基因工程及细胞工程必不可少的工具酶，是实现细胞融合操作的必须酶，随着生物工程的迅速发展，溶菌酶将具有极高的应用价值。1结晶法溶菌酶具

5、有耐热、耐酸的特性，并且易溶解在盐溶液，稳定性好，通过改变盐溶液的条件，可使溶菌酶以晶体形式析出而得以分离，结晶法也因此成为制备【15】溶菌酶晶体最为传统的方法Z—。此方法原料易得，制备过程不是很烦琐。采川还原性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定溶菌酶纯度，12%的分离胶、5%的浓缩胶，上样量lOuLo同时，采用SDS-PAGE和Superdex-200凝胶过滤层析,［9］测定溶菌酶的相对分子质量。杨景芝等对传统结品法做出了改进，通过调整透析液pH值,加入磷酸盐,再调整其pH值,然后离心去除杂质得到纯化液，使产率提高，活性增加。结晶法不适合

6、用以分离微量的溶菌酶。不过,结品法冃前仍然可以［16］用于提取卵白溶菌酶［4］。结品法分离溶菌酶的产率一般为60%〜80%。1.1离子交换法(Ion-exchangechromatography)离子交换法是利用溶液小各种带电粒子与离子交换剂Z间结合力的差异进行物质分离的操作技术，由于具冇简便、高效、成本低，且可自动化连续操作的优点，因此一直以来都是溶菌酶生产所常用的方法。通常选择弱酸性阳离子交换树脂进彳亍分离。冃前用于溶菌酶分离纯化的离子交换剂主要冇Datolite-464、724、732型弱酸性阳离子交换树脂,0903.D201大孔

7、离子交换树脂,CM、DEAE-纤维素,竣甲基纤维素(CMC)和竣甲基琼脂糖,CM.Sephardi阳离子交换树脂,DatoliteC-464树脂,CM.Topok.树脂,大空隙苯乙烯系强碱性阴离子［7］交换吸附树脂等。Duranco等也采用Datolite-464从耒被稀释的蛋清溶液中同时［］分离溶菌酶和抗生索蛋门。溶菌酶等电点为10.7,在酸碱条件下均较稳定。1不同的蛋口质由于等电点的差杲，使其即使在同一缓冲体系中电荷量和电荷密度分如均有差别，因此可根据待分离蛋清过敏原的等电点和酸碱稳定性选择川何种离子交换类型和柱材料。1.2膜色谱技

8、术(Membranechromatographytechnique)膜色谱技术是将腸分离-与液和色谱和结合的一种新型分离技术，其中亲和腸色谱法兼具了膜分离与亲和分离的特点，具有纯度高，压降小，分离快等特点，