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1、使用TALEN技术构建的GPR3敲出小鼠的筛选鉴定HUNANUNIVERSITY毕业设计(论文)设计论文题目：使用TALEN技术构建的GPR3敲除小鼠的筛选鉴定学生姓名：唐开翼学生学号：专业班级：学院名称：指导老师：20090940219生物技术2009级2班牛•物学院廖红东张儒学院院长：谭蔚泓2013年6月H湖南大学毕业论文(设计)笫I页使用TALEN技术构建的GPR3敲除小鼠的筛选鉴定摘耍TALEN(transcriptionactivator-likeeffectornuclease)技术是一种源于植物致病菌Xanthomonas的崭新的
2、靶向基因操作技术。与传统方法相比，TALEN具有很高的打靶效率,一般在60%左右，甚至更高，大大减少了构建基因敲除动物模型的工作量。GPR3编码产物是七次跨膜G蛋白偶联受体(G-proteincoupledreceptor,GPCR),前期研究证实，GPR3受体与神经退行性疾病和减数分裂阻遏等密切和关，然而其结构与功能的研究尚处于起步阶段，且作用于它的內源性激动剂和拮抗剂至今仍不清楚。本实验设计旨在综合运用鼠尾基因组DNA提取、PCR、酶切、DNA电泳和TA克隆测序等一整套现代分了生物学技术，筛选出用TALEN技术构建的首代GPR3敲除阳性小鼠
3、，为研究GPR3受体的在体生理功能及英调控机制提供可靠的动物模型，同时也为以GPR3受体为靶点的新药设计提供正确的药物筛选模型。关键词：基因敲除，TALEN,受体，GPR3,小鼠湖南人学毕业论文(设计)第II页ScreeningandidentificationofthefirstgenerationofGPR3knockoutmousegeneratedbyTALENAbstractTALEnuclease(TALEN)isanewtechnologytospecificallyandefTectivelymodifygenome・Trans
4、criptionactivator-likeeffectors(tales)areaclassofnaturallyoccumngDNA-bindingproteinsfoundintheplantpathogenXanthomonas・Comparedwithtraditionalgeneknockoutmethods,TALENhasahighertargetingefficiency,generallyaround60%・Itgreatlyreducestheworkloadofestablishingagene-knockoutanim
5、almodel.ThegeneGPR3encodesaGprotein-coupledreceptor3(GPR3)whichisanovelseven-helixtrans-membranereceptorsandanorphanreceptor.PreviousresearcheshaveidentifiedthatGPR3playsanimportantpoleinpromotingncuritcoutgrowth,maintainingmcioticarrestandaggravatingAlzheimer"sdisease・Howev
6、er,thesignaltransductionanditsfunctionalregulationmechanismsofGPR3isstillunclear.ByusingaseriesofmolecularbiologytechnologysuchasgenomicDNAisolationfrommousetails,enzymaticrestrictiondigestion,PCR,DNAagrose-gelelectrophoresis,TAcloningandDNAsequencing,wescreenedthefirstgener
7、ationofGPR3knockoutmousegeneratedbyembryomicroinjectionofTALENplasmidstargetingGPR3.Thecorrectgene-knockoutmicewereidentifiedwhichcanbeusedforfurtherstudyoftheGPR3functioninvivoandnewdrugscreeningtargetingGPR3.Keywords:geneknockout,TALEN,receptors,GPR3,mouse湖南人学毕业论文（设计）第III页
8、目录1绪论GPR3体11.1.1GPR3受体的结构、信号转导通路和生理功能11.1.2GPR3受体的研究展望11.2TAL效应核酸酶（TALEN）技术
