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1、黑龙江生物科技职业学院生物分离技术实训指导书二00五年三月目录1、综合实训一:L-胱氨基酸的制备12、综合实训二：树脂柱纯化法制备谷光甘肽33、综合实训三：锌盐沉析法提取胰岛素64、综合实训四：DNA制备95、综合实训五：菠萝蛋白酶的制备126、综合实训六：卵磷脂的制备及鉴定157、综合实训七：银耳多糖制备及鉴定和含量测定17图1-胱範酸提取操作流程综合实训一L-胱氨基酸的制备（4学时）一、目的要求1.学习胱氨酸的提取分离原理和方法。2.学会吸附分离技术的原理。二、实验原理胱氨酸是由两个B-筑基-a-氮
2、基丙氨酸组成的含硫氨基酸。胱氨酸呈六角形片状白色洁净或洁净粉末，无味，微溶于水，不溶于乙醇及其他有机溶剂，易溶于稀酸和碱液中。在热碱液中易分解。胱氨酸的等电点（pl）为4.6,熔点为260〜261°CO胱氨酸比半胱氨酸稳定，在体内转变成半胱氨酸后参与蛋白质合成和各种代谢过程，又促进毛发牛长和防止皮肤老化等作用。胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马茂、羽毛及动物角等的蛋白质中，其屮人发含量最高，达17.6%。胱氨酸是氨基酸屮最难溶于水的一种，因此可利用这种特性，通过酸水解，从废杂猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋口
3、中，分离提取胱氨酸。三、材料用具（一）材料废杂毛。（人发或猪毛）（二）试剂盐酸、氢氧化钠、乙酸、乙酸钠、氨水、硫酸铜、硝酸、硝酸银、硫化氮、硫貳酸钱、亚硫酸钠、碘化钾、活性炭、骨炭粉、硫酸卬醛溶液、澳液。（三）器具玻璃钢水解罐、耐酸锅、搪瓷缸、不锈钢桶、搪瓷桶、离心机、玻璃彳j、口纱布、温度计、酸度剂、布氏漏斗、3号垂熔漏斗、2号砂心漏斗、恒温水浴、碘量瓶、滴管、试管、移液管、最筒、烧杯、pH试纸、酸度剂。四、实验方法（一）流程见图1（二）操作1.清洗用60°C左右的热水，加少量洗涤剂，搅拌洗涤4〜6m
4、in,洗去吸附在毛发上的油脂，然后捞出，再用清水冲洗干净，滤干，放在通风处晒干或烘干备用。2.水解按毛发的最，最取2倍30%工业盐酸，加入到玻璃钢或擴瓷水解罐屮，通蒸汽加热到70〜80°C,立即投入清洗晒干的毛发，继续加热，间歇搅拌，使温度均匀，升温到100°C开始记温,每隔0.5h记温一次，在1〜1.5h内升温至110°C左右（即罐温）,以后继续维持罐压14.6kPa,水解13h左右，水解期间要有回流装置，保证水解酸度，使水解完全，水解时间可从水解罐内溶液温度达100°C时计算。水解完全后，停止回流，
5、立即趁热过滤，先用玻璃布抽滤除去人的黑腐质，然后再用双层纱布抽滤，将滤液移到中和锅内，滤液用1：10盐酸冲洗2〜3次，准备中和。1.中和将过滤好的滤液趁热在搅拌下加入浓度为30%〜40%的氮氧化钠溶液，当中和到pH达4.0时，停止加碱液，然后改用乙酸钠饱和溶液中和到pH为4.8左右，停止搅拌，静止10〜12h。用涤纶布过滤沉淀物，甩十或吊干，即得粗品。中和时温度应保持在50°C左右，而且要在0.5h内完成。2.提纯称取适量的胱氨酸粗品，加入粗品量13%〜14%的工业盐酸，搅拌30miri左右，等粗站全部
6、溶解后，在加入糖用活性炭，加热到90〜98°C,在此温度下恒温搅拌2〜3h,然后过滤脱色液，滤液加热到80〜85°C,在搅拌下加入30%氢氧化钠溶液，调节pH至4.8时，静置。使结晶沉淀完全。3.精致、干燥称取适量胱氨酸提纯后的粗品，加入5倍量的1：12的盐酸，加热到40°C时，加入5%骨炭粉，升温到60°C,保温搅拌lh。然后用布氏漏斗过滤，滤液在经过3号垂熔漏斗过滤，滤液应无色透切。将溶液移入搪瓷缸中，搅拌下加入10%氨水调节溶液pH至4.8,静置5〜6d,即有胱氨酸精品析出，过滤出结晶，用无离了水
7、洗至无氯离了，干燥即得成品。五、注意事项1.用硫酸调节pH值时，应用酸度计边测边调。保证其准确性。2.水解终点的判定，加入10%氮氧化钠溶液加L,在滴加硫酸铜溶液儿滴，摇匀后，如仍有明显的天蓝色表明水解完全。六、思考题1.胱氨酸的物化性质是什么，通常提取胱氨酸选用什么原料？2.提取胱氨酸时应注意什么条件变化？综合实训二：树脂柱纯化法制备谷光甘肽（6学时）一、目的要求1.了解树脂柱纯化法制备谷光甘肽的基本原理；2.熟悉树脂柱具体应用技术；3.掌握多肽类生化物质提取纯化的基本操作技术。二、实验原理谷胱甘肽是
8、由谷氨酸、半胱氨酸和廿氨酸构成的三肽。B然界屮谷胱廿肽主要存在于酵母、谷物种子胚芽，人体和动物的心脏、肝脏、肾、肌肉、血液的红细胞和眼球中。动物组织中含量较高，阳植物组织中的含量较低。正常人体内述原性谷胱LT肽（GSH）和氧化性谷胱甘肽（GSI1G）的比例为100：1,还原性谷胱甘肽（GSI1）,分子小,是机体内重要的活性物质，它具冇清除白由基、减毒、促进铁质吸收及维持红细胞膜的完整性、维持DNA的生物合成、细胞的正常生长及细胞免疫等多种牛
