《发酵工程及设备》实验指导书

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1、《发酵工程及设备》实验指导书2005年4月目录实验一土壤中产醋酸菌种的分离筛选????????????????????1实验二紫外线的诱变育种?????????????????????????2实验三摇床培养确定酵母菌体培养和营养条件????????????????3实验四细菌增殖曲线的测定？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？?4实验五木霉T6淀粉酶的固态发酵实验???????????????????6实验六小型连续发酵实验?????????????????????????9实验七啤酒麦芽汁制备实验???????????????????????1

2、1实验八啤酒的酿造???????????????????????????14实验九啤酒风味保鲜期的测定??????????????????????15实验十反应器的安装与拆卸???????????????????????16实验■•一pH电极的校1E?????????????????????????17实验十二氧电极的校正?????????????????????????19实验十三体积溶氧传递系数的测定????????????????????21实验十四反应器培养液的灭菌与接种培养?????????????????23实验十五气升式生化反应器的使用???

3、?????????????????24实验十六中试发酵设备的使用方法????????????????????25实验十七补料分批发酵动力学研究？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？27实验一土壤中产醋酸菌种的分离筛选一.实验目的：1.根据一定的生产目的如抗生素或酶类的生产，建立不同的筛选模型，并从特定的样品如土壤中筛选!11高产适宜的菌株。2.加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识；学会常规选种和育种的方法，树立科学认真仔细的态度，培养科研协作精神。二.基本原理：分离上样中的大部分细菌的分离程序中无需进行富集，但对某些少数细菌则要求特殊的富集或选择技术才

4、能很好地被分离培养。运用细菌的酶诱导性,在分离培养基中添加若干抗生素、复杂底物及生长因子的前体物质来激活细菌某一特殊基因组，可以建立若干富集技术。同样，富集可以促进抗性的产生并维持下来。三.培养基与仪器1•培养基：牛肉膏蛋白腺培养基2.仪器：全自动高压灭菌锅，培养箱，酸式滴定管四.实验步骤1.确定方案：首先查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。2.釆样：选取离地面5〜15cm处的土，用小铲子取样，将采集到的土样盛入聚乙烯袋或玻璃瓶屮。3•增殖：称取0.5g土样（湿重），加到含10ml25%无菌土样浸出汁的试管中，于26°C、150rpm条件下振荡培养25m

5、in,以适宜的样本稀释液系列稀释培养液。然后取o.lml涂布于已添加及未添加富集底物的土浸出汁平板。26°C下皿底朝上培养4-10天，将长出的菌落接入斜面，但应挑分离成单个的，以免不纯。4.分离：利用产物特性分离得到产目标产物的纯种。初筛：将细菌接种到含有一定的碳酸钙的牛肉膏蛋白豚固体培养基中进行培养，如果细菌产酸则培养基出现混浊半透明状态，可以根据菌体产&酸溶解出现透明圈大小初步筛选出产酸高的菌种。复筛：将初筛菌种在斜面培养纯化后，接到牛肉膏蛋白月东液体培养基中37°C深层培养24h后。取出培养液5ml加入试管内，加O.lmoL/LNaOH液屮和，然后加

6、氯化铁液2—3滴，摇匀，观察液色是否变为黄红色，如将试管放在火焰上煮沸，有无红褐色沉淀生出，根据所消耗的NaOH量确定产物醋酸的具体生成量。一.实验结果六•思考题如果培养中有其它种挥发酸共存，应采用什么方法来测定醋酸的生成量？实验二紫外线的诱变育种一.目的要求通过实验，观察紫外线对枯草芽抱杆菌的诱变效应，并学习物理因素诱变育种的方法。二.基本原理紫外线对微生物有诱变作用，主要引起是DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻卩密碇间形成共价结合的胸腺卩密唳二聚体），从而引起菌体遗传性变异。一.菌种与仪器菌种：枯草芽抱杆菌；仪器：血球计数板，显微镜，紫外线灯(

7、152,电磁搅拌器，离心机二.操作步骤(1)菌悬液的制备(a)取培养48小时的枯草芽砲杆菌的斜面4—5支，用无菌生理盐水将菌苔洗下，并倒入盛有玻璃珠的小-:角烧瓶屮，振荡30分钟，以打碎菌块。(b)将上述菌液离心(3000r/min,离心15分钟)，弃去上清液，将菌体用无菌生理盐水洗涤2—3次，最后制成菌悬液。(c)用显微镜直接计数法计数，调整细胞浓度为每毫升108个。(2)平板制作将淀粉琼脂培养基溶化后，冷至55°C左右时倒平板，凝固后待用。(3)紫外线处理(a)将紫外线灯开关打开预热约20分钟。(b)取直径6cm无菌平皿2套，分别加入上述菌悬液5ml,

8、并放入无菌搅拌棒于平皿中。(c)将盛有菌悬液的2平皿置于磁力搅拌器