发酵工程实验实验指导书

《发酵工程实验实验指导书》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、发酵工程实验指导书（2014版）宁波大学海洋学院2014.09实验乳酸菌的分离与初步筛选实验实验二乳酸菌的初步鉴定实验实验三乳酸菌菌种保藏实验实验乳酸菌的培养与发酵实验实验五乳酸菌发酵产物的分析与测定实验一乳酸菌的分离与初步筛选实验一、实验目的及要求1、掌握从环境样品中分离所耑微生物的一般操作2、掌握平板划线分离菌种的原理和操作方法3、掌握利用透明阁法获得单菌落菌株的原理。二、实验原理自然样品中存在混杂的微生物，通过选择性培养基及样品稀释使形成细胞分散液，再通过固体培养基在合适的培养条件下培养形成单菌落，由此得到分离的纯培

2、养菌株。乳酸菌最基本的代谢特性是发酵产酸，待分离样品在合适的培养基和培养条件下，乳酸菌在特定没计的培养基中由于生长产酸产生溶钙形象，从而在培养基屮产生透明圈，透明圈直径大小可反映菌落生长产酸量的大小，而不是乳酸菌或不产生酸积累的细菌不能产生透明圈。三、实验器材1、待用分离样品（腌菜，各种泡菜，酸奶，梢物汁液，等）：2、培养基：MRS培养基或改良乳酸菌分离培养基：无菌水；3、器皿与设备：培养皿、移液管、试管、三角瓶、接种环、涂布棒、超净工作台、天平、采样瓶，培养箱，等。叫、方法和步骤1、分离样品的采集采样须知：结合乳酸菌菌种

3、特性（文献资料查阅），获取乳酸菌在自然界或相关产品等的分布规律，设计样品采集范围。采集样品经适当保存或立即处理。2、菌种的分离称収样品5g或5ml+加到45ml无菌水的三角瓶中（30°C恒温处理20分为佳）今充分震荡后（含玻璃珠）使其自然沉淀4用1ml移液管吸取上清菌悬液1ml至9ml无菌水试管中今依次进行10倍稀释至10"4〜1（T5+用移液管吸取ImL菌悬液至含碳酸钙的MRS培养基平板屮，涂布均匀+3（TC恒温培养2〜3天+观察菌落，分别挑取生长良好的含透明圈的可疑乳酸菌单菌落，分别移接至普通乳酸菌培养基的斜囬试管，菌

4、种编号，30°C恒温培养1〜2天，长菌后在4°C冰箱保存待用。五、实验结果1、在培养平板中观察各菌落生长情况，仔细观察nJ•疑乳酸菌的菌落形态，大小，色泽，透明圈等特征，运用所学微生物知识初步确定其属于哪个菌属。2、记录，选取，并标记，斜面移接和培养，待用。六、思考题1、阅读文献资料后设计你的采样方案并说明理由？目的是最大可能筛选分离得到乳酸菌。2、产酸性微生物分离筛选的一般步骤？写作实验报告附培养基配方及制备方法含碳酸钙的MRS培养基（分离实验），除去碳酸钙即得斜面培养基。配方如下：蛋白胨10g,牛肉膏10g，葡萄糖20

5、g,酵母膏5g,拧檬酸氢二铵2g，MgSO4.7H2O0.58g,MnSO4.4H2O0.25g,乙酸钠5g,吐温-80ImL,CaCO320〜30g,琼脂15g,蒸馏水lOOOmL,pH6.8o（液体培养基则不加琼脂）。（注：目前己有合成的MRS培养基）配制方法：将各成分按配方比例溶解，冷却至50°C,以盐酸、或醋酸或氢氧化钠调节pH为6.8U发酵工程实验指导书左右，分装三角瓶，按量加入1.5%琼脂，121°C灭菌20min,备用。CaCO3分开灭菌用时加入。乳酸菌生长培养基或斜而保存培养基，成分同MRS培养基配方（去除

6、CaCO3）。实验二乳酸菌的初步鉴定实验—、实验0的1、Y解菌种初步鉴定基本方法2、掌握乳酸菌鉴定的基本方法二、实验原理对实验一得到的经初步判定为乳酸菌的纯培养物，进一步通过其形态或生物学特性进行分析或测定，根据乳酸菌鉴定相关手册加以比较，初步鉴定得出分离菌株的种属类型。三、实验器材显微镜，简单染色液（美蓝、结晶紫、碱性复红，等），95%乙醇，。其它同实验一四、方法与步骤1、菌落形态观察：在固体培养基屮培养后形成的菌落，观察形态（如菌落大小，边缘形状，隆起程度，等）；并作好记录。2、细胞形态观察：通过简单染色法或革兰氏染色

7、法观察细胞形态，或G+及Cf特点。方法：简单染色法流程涂片-＞千燥-＞固定-＞染色-＞水洗-＞干燥-＞镜检革兰氏染色法流程涂片-＞干燥-＞固定-＞染色（初染—媒染-＞脱色-＞复染）_＞镜检。其它：生理生化鉴定或PCR分子鉴定（待用）建议增加碳源利用实验（试纸条）五、实验结果与分析1.菌落形态观察结果。2.细胞形态观察结果。六、问题（作业）：乳酸菌的基本生物学特性?实验三乳酸菌菌种保藏实验一、实验目的了解菌种保藏基本原理与掌握菌种保藏方法二、实验原理对实验二得到的经初步判定为乳酸菌的纯培养物进行菌种保藏。菌种保藏原理：在低温

8、、缺氧环境等条件下，抑制微生物的生命活动但不致死，使微生物长期保存生命活力且不死亡。保藏法原理适宜菌种保藏时间操作要点优点缺点斜面保藏法低温各种微生物3-6个月4°C操作简便易污染、易变异穿刺保藏法（矿物油）缺氧好氧微生物6个月•10年覆盖无菌液体矿物油操作简便征对特殊微生物干燥载体保藏法寡低干营温产孢