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1、重组TaqDNA聚合酶的表达和纯化鉴定24(5):124〜126江西农业学报2012,ActaAgriculturaejiangxi垂组TaqDNA聚合酶的表达和纯化鉴定刘钦松，刘孟刚，张从从，张程，许彤(山东博奥克生物科技有限公司，山东聊城252000)摘【H的】。【方法】耍：表达、纯化TaqDNA聚合酶，并检测其扩增性能活化含TaqDNA聚介酶基因的菌株JM109,IPTG诱导表达。H的蛋白利用AKTA蛋白纯化系统，IleparinSepharoseFastFlow,Q—Sepha-依次过Affi—GelBlu
2、eSepharose,roseFastFlow,。【结果】经SDS—PAGE分析，以国外进口Taq酶为标准，采用对比法初略测定酶活性，验证产品质量制备的TdqDWA聚合酶具有扩增效率高、。【结论】纯度高、特异性强、无核酸酶污染、活性稳定等优点成功表达纯化TaqDNA聚合酶，其扩增性能达到菇至超过国外同类产品。关键词:TaqDNA聚合酶；纯化;扩增性能中图分类号:Q814.1文献标识码：A文章编号:1001-8581(2012)05-0124-03Expression,PurificationandIdentific
3、ationofRecombinantTaqDNAPolyine:raseLIUQin—song,LIUMeng—gang,ZIlAXGCong—cong,ZHANGCheng,XUTong(ShandongBoaokoBiotechnologyLimitodCompany,Liaochong252000,China)Abstract：InordortocxpressandpurifyTaqDNApolymoraso,anddetectitsamplificationpetfornumce,E.colistrainJ
4、M109containingthegeneofTaqDNApolymerasewasactivated,andthegenewasexpressedundertheinducemenlofIPTG.TheexpressedHcparinSepharoscFastFlowandprotcinwaspurifiedbyAKTAproteinpurificationsystemthroughpassingAffi—GolBluoSopharose,Q—SopharoseFastFlowinturn.TakingTaqon
5、zymcimportcdfroniabtoadQsthcstandaTd,theenzymeactivitywasroughlydeter-andtheproductqualitywasverifiedfinally.TheresuItsrevealedthatthepreparedminedthroughantithesesandSDS—PAGEanalysis,TaqDNApolymerasehadthefollowinggoodcharacteristies：highamplificationefficien
6、cy,highpurity,strongspecificity,nonucleasepollutionandstableactivity.Inconclusion,thercconibinantTaqDNApolymorasewassuccessfullyexpressedandpurifiod,anditsamplificationperfonnancecould:reachorexceedthatofthesimilarproductsimportedfromabroad.Keywords：TaqDNApoly
7、merase；Purification；AmplificationperformanceMullis等[1]1985年提出聚合酶链式反应（PolymerasePCR）,1988年Saiki等[2]从温泉的细菌ChainReaction,Thermusaquaticus中提収出耐热TaqDNA聚合酶，分子量为94kDa,由832个氨基酸残基组成，热稳定性好，在75〜8CTC条件下每个酶分子每秒钟可聚合约150个核昔酸，在PCR实验中起着重要作用，被广泛应用于生物学、医学等领域[2—4]公司）,高速冷冻离心机（CR21
8、GHT,H本H立），超声波细胞粉碎机（JY92—IID,宁波新芝），凝胶成像仪（BioDoc—It—体机，PCR仪（TC—512,上海思们明），英国TECHNE）o氨节青霉素（Ampicillin）抗生素购自AMRESCO公YeastExtrant购自OXOTD公司，Affi—Gel司；Tryptone^HeparinSepharoseFastFlo\Q
