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1、静息细胞转化衣康酸的研究李俊峰】，门晋名】，梁鹏飞2(1.青岛科技大学化工学院，山东青岛266042；2.山东迪沙药业有限公司，山东威海264205)摘要：综利用衣康酸为唯一碳源，从150株海洋细菌中筛选出一株衣康酸利用优势菌株：bsf4.5o以衣康酸为底物进行细胞催化，获取它们的静息细胞。然后利用薄层层析，高效液相以及等技术対催化产物进行进行分析。分析结果表明利丿〕J静息细胞转化衣康酸有新物质产生。静息细胞bsf4.5对衣康酸的转化率为73.78%。关键词：180・61微生物学；衣康酸；静息细胞；柠苹
2、酸屮图分类号：Q815TheResearchOfRestingCellsTransformItaconicAcidLIJunfengi,MENJinmingi,LINGPengfei2(1.CollegeofChemicalEngineering,QingdaoUniversityofScienceandTechnology,ShanDongQingDao266042;2.ShangdongDishaPharmaceuticalCompany,ShanDongWeiHai264205)Abstract:
3、Inthispaperjnthispaper,utilizingitaconicacidassolecarbonsource,onepredominantstrainswereisolatedfrom150marinebacteria:bsf4.5・Usingitaconicacidasasubstrate,therestingcellswereobtainedbyCellcatalytic.Thethinlayerchromatography,highperformanceliquidwereused
4、toanalysisthecatalysate.Theresultshowedthatnewsubstanceswereproductedbyrestingcells・Theconversionrateofitaconicacidbyrestingcellsbsf4.5was73.78%.Keywords:180-61microbiology;itaconicacid;restingcells;citramalicacid0引言衣康酸(Itaconicacid)乂名亚甲基丁二酸。它的分子式为：CH2=C
5、(CO2H)CH2CO2H,是一种重耍的有机酸。1837年首次由柠檬酸高温分解脱水而制得。衣康酸在常温下为门色粉末或无色晶体，因其含不饱和双键，具有活泼的化学性质，可进行口身间的聚合，也能与其他单体如丙烯睛等聚合，溶于水，乙醇等其它溶剂；能进行各种加成反应，酯化反应和聚介反应，是化学合成工业的重要原料，也是化工生产的重要原料。有报道指出可以利用静息细胞通过甲基反丁烯二酸生产柠苹酸⑴。然而，甲基反丁烯二酸是一种贵重的原料，对柠苹酸的生产來说它是一种匮乏的起始原料。相比Z下，衣康酸的工业生产由微生物发酵而來
6、，比较廉价。并且衣康酸能作为碳源和能源被微生物利用，因此,利用衣康酸的微生物反应生产柠苹酸是可行的［2］。1材料与方法1.1菌种bsf4.5基金项H：K国家科技支撑计划(项目编号:2011BAD14B04)2、海洋公益性行业科研专项经费项目(项目编号：201105020)3、国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室开放基金项H(项H编号：MBSMAT-2010-05)4、青岛市应用基础研究计划项目(项目编号：12・143・(3)・jch)作者简介:李俊峰,(1971-),男,汉族，山西运城人，讲师,博士,从
7、事微生物活性物质方面的研究。E-mail:lijfl999@qust.edu.cn1.2来源利用衣康酸为唯一碳源的选择性培养基中筛选出的优势菌株。1.3培养基LB固体培养基：胰蛋门豚10g酵母提取物5g氯化钠10g琼脂20g水1000mlpH7.0LB液体培养基：胰蛋白月东10g酵母提収物5g氯化钠10g水1000mlpH7.01.4主要试剂与设备主要试剂：衣康酸；柠苹酸；甲苯；Tris-HCL缓冲液溶液；浓硫酸；硫酸镀；乙酸乙酯等。主要仪器：SPX型智能生化培养箱；高效液和色谱仪；HZQ-C空气浴振荡
8、器；台式离心机等。1.4.1静息细胞的获取収出保存在4°C的bsf4.5的LB固体培养基，挑取一环菌，接种于50mLLB液体培养基中；28°C,200r/min摇床培养24小时。将富集菌体的培养液移至50mL离心管中,5OOOr/min,15°C,离心10分钟；弃掉上清液，用无菌水清洗沉淀，震荡混匀，相同离心条件下，重复3次，去除上淸液，获取静息细胞「习。1.4.2细胞催化在含冇静息细胞的离心管屮各加入50mlpH=8.0的Tris-HCl
