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时间:2019-11-15
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1、灰霉菌胞外大分子毒素分离及其是否为糖蛋白的定性鉴定摘要:灰霉菌(Bolrytiscinerwa)能侵染1000多种植物,危害多种粮食和经济作物,造成极大的经济损失。灰霉菌产生的毒素可导致槓物萎蒸、褪绿和组织坏死等病症,而目前报道的灰霉菌毒素大多数为小分子物质,对灰霉菌分泌的大分子毒素了解不多。因此,分离纯化灰霉菌分泌的大分子毒素,鉴定其性质对于认识灰霉菌致病的分子机制具有重要意义。本研究利用过滤、离心、透析和冷冻干燥等方法对灰霉菌培养液屮的大分子物质进行了提取分离,并对其进行了植物毒性鉴定。用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对分离出来的大分子毒素进行了
2、纯化,回收蛋白条带,渗入植物叶片进行毒素鉴定,将有毒性的条带进行二次聚丙烯酰胺凝胶电泳并用高碘酸-希夫试剂进行染色鉴定是否为糖蛋白的蛋白性质。结果表明,灰霉菌胞外的大分子毒素为糖蛋白。关键词:灰霉菌;拟南芥;胞外毒素;糖蛋白PurificationofHigh-MolecularToxinsfromCultureofBotrytiscinereaandTheirGlycoproteinPropertyIdentificationAbstract:Botrytiscinereacaninfectmorethan1000speciesofplan
3、ts.Anditharmsavarietyoffoodandeconomiccrops,whichcouldcausegreateconomicloss.ThetoxiccompoundsproducedbyBotrytiscinereacancausewilting,chlorosisandtissuenecrosisetc,diseasesymptominplants.PreviousliteratureshowedthatanumberoftoxicmetaboliteshavebeenisolatedfromBotrytisciner
4、ea,butthesetoxinsmostlyarelowmoleculeorganicsubstances.Thehigh-moleculestoxinsfromBotrytiscinereaarepoorlyunderstood.ThemolecularmechanismsofpathogenicitybythisfungaLInthisstudy,themacromoleculecompoundsfromcultureofBotrytiscinereawereextractedandseparatedbyusingmethodsoffi
5、ltration,centrifugal,freeze,dialysisanddrying.Theplanttoxicityoftheseextractswasidentified.Next,thesetoxiniccompoundswerepurifiedusingpolyacrylamidegelelectrophoresis(PAGE).Theglycoproteinbandingwererecollected,andwereinfiltratedintoplantleavestochecktheirtoxicity.Next,prot
6、eintoxinsarepolyacrylamidegelelectrophoresis(PAGE)againandtheseproteintoxinsareglycoproteinornotwerecheckedwithperiodicacid-Schif(PAS)regent.TheresultsshowedthatthemacromoleculartoxinsproducedbyBotrytiscinereaarekindsofglycoprotein.Keywords:Botrytiscinerea,^4rahidopsisthali
7、anaextracellulartoxin;glycoprotein灰霉菌又名灰葡萄孑包菌(Botrytiscinewa)是灰霉病的病原物,属于半知菌亚门,丝他目,淡色泡科,葡萄抱属是一种腐生型病原菌。近年来随着保护地蔬菜种植面积的扩大,其发生危害有严重的趋势,产量损失很大,特别是在生产01中或产后贮藏过程中蔓延速度快,灰霉病成为生产上一种世界性的主要病害⑴。灰霉菌属于坏死营养型病原菌,其侵染植物的方式存在两种可能,或是先分解寄主的表而细胞壁,以便更为有利地进入寄主细胞内寄生;或是一开始就分泌毒素,将周围的细胞杀死,然后以此作为生存的养分⑵
8、。在植物病程屮,植物病原菌产生的次生代谢产物统称为植物毒素,其中起决定作用的有毒物质主要包括非蛋白质氨基酸、牛物碱、蛋白质毒素、不含氮毒素和牛氧糖昔类毒素等五类⑶。
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