印片及其在术中冰冻病理诊断应用中的体会

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1、印片及其在术中冰冻病理诊断应用中的体会首都医科大学附属北京同仁医院刘红刚电话：010-58268685Email：liuhg1125@163.com前　言-1细胞印片，特别是怀疑有肿瘤的淋巴结切面的印片对诊断很有参考价值，因一张好的印片比起冷冻切片和石蜡切片来说可真实反映细胞的形态和结构，并可用于免疫组织化学，因此除了纤维组织较多的组织和肿瘤外，一般细胞丰富的组织和肿瘤，在新鲜标本切开后最好都做印片观察（刘彤华）。前　言-2手术过程中，为及时并准确确定病变性质，给临床提供可靠的手术依据，通常采用冰冻切片方法。自1927年Dudgeon等采用了术中印片细胞学诊断之后，又有许

2、多文献报导证实该方法不仅简单、快速，而且常常可以辅助冰冻切片诊断。细胞印片诊断准确率均在95.0%以上，假阳性率在0.5%以下，与冰冻切片诊断相近（钱和华、阚秀）。前　言-3新鲜标本印片细胞学检查能为冰冻切片提供许多信息。在乳腺癌、颅内肿瘤、甲状腺、胃肠肿瘤等手术快速病理诊断中，与冷冻切片结合运用，可在一定程度上防止误诊或漏诊，提高冷冻切片诊断的准确性。有时细胞印片单独应用也是一种较好的快速定性诊断方法。前　言-4组织印片诊断不同于一般涂片单纯细胞学诊断，而是细胞学与组织学相互结合观察的结果，有时可进行组织类型的诊断。在冷冻切片与快速石蜡切片的同时作快速印片，可有效纠正部分

3、误诊（刘自光）。第一章印片技术第一节印片的制作一、印片制作的一般步骤锐刀切开组织载玻片轻轻触片，垂直适当用力蘸取细胞，避免平行拖拉95%乙醇固定2min（1-3min）乙醇（无水→96%→90%，各15s）苏木素1-2min→流水→1%盐酸乙醇液2-3次→水冲伊红15s→梯度乙醇脱水/低温吹干二甲苯透明15s封固二、常用的固定液及固定时间95%乙醇乙醚，固定时间30s甲醛冰醋酸乙醇溶液，固定时间30s10%福尔马林乙醇（浓度约85%）溶液，固定时间2-3min3%冰醋酸乙醇（95%）15s三、常用的染色方法-1苏木素-伊红染色：苏木素染色采用加温或微波处理。方法是把固定好的

4、玻片经水洗→将苏木素液滴加到玻片上覆盖全部细胞→置60℃烤箱内1min或微波（低档）处理30s→自来水洗20s→0.5%盐酸乙醇分化→1%氨水溶液蓝化10s→0.25%伊红染数秒→梯度乙醇脱水→二甲苯透明→中性树胶封片。全部制片时间在10min以内完成。瑞氏染色（略）三、常用的染色方法-2姬姆萨染色（略）RapidStain(Rap)两步染色法将未经固定待干未完全干的印片→加RapA液0.8-1ml，覆盖印片后→加B液1.5ml混均，覆盖印片→静置1-2min→自来水清洗、烤干（或电吹风吹干）、封片（3min出片）四、制片的注意事项-1印片时的要点实性包块印片应选取病变典型

5、、质嫩及脆弱部位印片病变区较小可适当多作几张印片，以防止细胞过少或出现假阴性结果囊性包块印片时应先将囊液放掉，选取囊壁较厚、病变典型或有乳头的位置，如标本有囊液或出血，可先用干纱布将液体擦干，然后再作剖面印片尽可能避开出血、坏死及脂肪组织较多区域，并防止水分等混入标本操作要轻巧，用力要适当，避免挤压以防损伤细胞印片要均匀，厚薄适度，太厚细胞堆叠，太薄细胞过少，均影响诊断尽可能多印几个切面，以防因病灶太小而遗漏（汪兆亮，2007）四、制片的注意事项-2及时正确地固定固定的目的是保持细胞自然形态、防止细胞自溶。四、制片的注意事项-3印片后处理印片切勿高温烘烤、干燥过度，以防细胞

6、变形、核染结构不清，造成人为细胞退变，影响诊断。印片放置时间不能过长。印片放置5h以内可见细胞轮廓，细胞不同程度退变，印片放置10h以后细胞结构不清，细胞破坏，核肿大、溶解。固定液的选择很重要，经反复试验比较证明95%乙醇乙醚或甲醛冰醋酸具有较好的固定效果，乙醇乙醚固定液渗透性较强，固定效果较好；甲醛冰醋酸可以增强固定效果，对抗乙醇固定的收缩作用，增强染色效果。印片固定时间不可过长或过短，时间过长容易导致细胞核过度收缩，核染色变深，核内染色质浓缩不清楚；时间太短容易使细胞肿胀变大，影响诊断。四、制片的注意事项-4提高染色质量印片染色质量的好坏在很大程度上直接影响细胞学诊断的

7、准确性。术中快速病理诊断需要在很短的时间内对组织病变做出诊断，在节约时间的同时不能忽略了印片制作的质量。常规苏木素-伊红染色需要较长时间，不适用于快速诊断。传统使用的乙醇灯加温法效果不理想，容易使玻片受热不均匀，染色深浅不易控制，效果不佳。有人采用烤箱加温或微波处理染色法，时间容易掌握，玻片受热均匀，染色效果好，细胞核结构清晰、核浆对比度良好，而且缩短了制片时间（苏木素染色置60℃烤箱内1min或微波（低档）处理30s）。第二节印片细胞学应用的基础恶性肿瘤细胞，无论是癌或肉瘤，都具有细胞成分丰富，容易脱落的特点，因