PNH克隆化检测方案指南

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1、PNH克隆化检测方案指南岳保红教授、、、主任技师、主任技师、、、硕士生导师、硕士生导师、、、医学博士、医学博士郑州大学一附院检验科血液细胞室郑州大学医学检验系临床血液学检验教研室1PNH概述PNH
Paroxysmalnocturnalhemoglobinuria
阵发性睡眠性血红蛋白尿
PNH是一种由于造血干细胞“磷酸酰肌醇糖苷A（PIG-A）”基因突变所致的疾病，，表现为后天获，表现为后天获得性红细胞膜内在缺陷的慢性血管内溶血性贫血
临床上主要以慢性血管内溶血性和血红蛋白尿为特征特征1.红细胞膜对补体敏感2.慢性血管内溶血3.血红蛋白尿（（间歇（间歇、、睡眠、睡眠）4.全血细胞

2、减少5.反复血栓形成机制：PIG-A突变-GPI锚连膜蛋白缺失1.GPI锚连膜蛋白：：连接蛋白：连接蛋白特定蛋白：：抑制补体激活：抑制补体激活、、膜反应性溶解、膜反应性溶解2.CD55衰变加速因子：：补体激活的：补体激活的C3、C5转化酶水平抑制CD59反应性溶血膜抑制物：：阻止补体：阻止补体C9转变成攻膜复合物3.同时发生在红细胞、、粒细胞、粒细胞、、单核细胞、单核细胞、、淋巴细胞、淋巴细胞临床表现1.血红蛋白尿，，酱油或葡萄酒尿，酱油或葡萄酒尿，，与睡眠有关，与睡眠有关2.贫血、、感染、感染、、出血、出血，，再障，再障-PNH综合症3.血栓形成，，溶血促凝物质释放，溶血促凝物质

3、释放+补体作用于血小板GPI-锚和膜蛋白PROTEINAspC=OP正常NHPNHRCHO2TCHAsE2pINOC=OO=P=ONHCOHC2HO2O=(1-2)P=O(((1-41-1-O)62C))HO2(1-6)OCOH-PO-OC(1-4)HNC2OO=OOO-P=OO-P=OONCCHOCHCHNH=O2222COH2NO-P-OH2CHCHCHO22OOC=OC=O
PNH红细胞缺失
CD55
CD59CD59CD59的缺失导致补体攻膜复合物的形成的缺失导致补体攻膜复合物的形成C9CD55C5b-8C5b-8CD59CD59C9C9WalportMJ,etal.NEn

4、glJMed2001;344:1058-1066+实验室检查1.血象：血红蛋白<60g/L，，粒细胞，粒细胞、、血小板或全血细、血小板或全血细胞减少2.骨髓象：三系增生活跃，，幼红细胞为主，幼红细胞为主，，或增生低，或增生低下/再障3.溶血检查：血清游离血红蛋白：：升高：升高结合珠蛋白：：下降：下降血红蛋白尿：：阳性：阳性尿含铁血黄素（Rous试验）：阳性4.血清学实验：Ham试验2PNH的诊断PNH检测临床适应证1.血管内溶血证据：：：血红蛋白尿：血红蛋白尿、、、血浆血红蛋白增高、血浆血红蛋白增高2.不能解释的溶血现象，，，同时伴随有，同时伴随有：：：IDA、、、腹痛、腹痛、、、

5、食管痉挛、食管痉挛、、、血栓、血栓、、、粒细胞减少、粒细胞减少、、、血小板减少、血小板减少3.一些Coombs’阴性的溶血4.非常规表现的血栓形成不常见的位置、、、伴有溶血性贫血、伴有溶血性贫血、、、伴不能解释的血细胞减少、伴不能解释的血细胞减少5.有骨髓衰竭证据怀疑或证实AA或增生不良性贫血RCUD其他不明原因的血细胞减少（（（多种检查完成后（多种检查完成后）））检测内容RBCs&RBCsLeukocyteLeukocyte酸溶血试验（（（FLAERHamtest）））CD55、、、(((嗜水气单胞(嗜水气单胞蔗糖溶血试验CD59菌溶血素)))Hamtest:特异但不敏感Flow

6、cytometry:评价血细胞膜上存在或缺失GPI连接的膜蛋白CD55andCD59FLAER
ClinicalCytometry，2010，78:211–230
GuidelinesfortheDiagnosisandMonitoringofParoxysmalNocturnalHemoglobinuriaandRelatedDisordersbyFlowCytometry.FLAER（fluorescentaerolysin）
荧光标记的“嗜水气单胞菌溶素”，，能特异性结合，能特异性结合GPI-锚
一旦与GPI结合，，显示荧光，显示荧光
PNH细胞缺乏或部分缺乏GPI，，可测定

7、荧光强度并计数，可测定荧光强度并计数
FLAER为PNH测定提供有明显优势的试剂FLARE和GPI连接蛋白检测的比较3流式细胞术测定PNH常规和高敏感性分析的设门策略标本准备溶血和细胞获取1RBC分析—常规检测2白细胞分析—常规检测3高敏感性检测1.RBC1.RBC分析分析————常规检测常规检测抗体过量抗体选择图形与设门RBC分型RBCRBC分析分析————常规检测常规检测
单一红细胞测定PNH不能充分评价PNH患者，，因为溶血，因为溶血和输血能明显掩盖、、低估、低