flaer多参数检测pnh克隆的影响

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1、FLAER多参数检测PNH克隆的影响　　阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种获得性克隆性造血干细胞疾病，其发病机制主要是由于体细胞X染色体上的PIG-A基因突变，导致血细胞膜表面糖化磷脂酰肌醇(GPI)锚合成障碍，锚连接蛋白缺失。传统的诊断方法主要有蔗糖溶血试验、酸溶血试验、尿含铁血黄素试验，但这些方法敏感性、特异性差。近些年来，通过流式细胞仪检测CD55、CD59已经成为诊断PNH的常规方法，特别是CD59，其敏感性高于CD55，在PNH诊断过程中被认为是一个优于CD55的指标。荧光标记的无活性嗜水气单胞菌溶素前体的变异体(FLAER)可以特异性的与GPI锚连

2、蛋白结合，经流式细胞仪检测，其特异性和敏感性较传统方法更好。PNH、再生障碍性贫血(AA)和骨髓增生异常综合征(MDS)均为骨髓衰竭性疾病，具有相似的发病机制和临床表现，早期鉴别诊断常很困难。本文联合FLAER、CD45、CD15、CD24多参数检测粒细胞PNH克隆以及CD59检测红细胞PNH克隆，旨在有效提高PNH克隆检测的敏感性、特异性，有助于骨髓衰竭性疾病的早期鉴别诊断，现报道如下。　　1　资料与方法　　1.1　一般资料　所有病例均来自于本院血液科连续48例住院患者。其中PNH患者9例，AA患者13例，诊断均符合血液病诊断及疗效标准;MDS患者11例，符合20

3、08年ann-DS患者11例，男5例、女6例，年龄41～72岁，中位年龄53岁，其中RCMD　1例，RCUD　6例，RAEB-Ⅰ2例RAEB-Ⅱ1例，5q-综合征1例;对照组15例，男6例、女9例，年龄19～61岁，中位年龄34岁。　　2.2　不同方法对PNH患者检测的比较　PNH组患者FLAER缺失率和CD59缺失率分别为(70.07±28.77)%和(38.51±29.15)%，显著高于对照组、AA组、MDS组，差异有统计学意义(P<0.05)。FLAER检测结果明显高于CD59检测，差异有统计学意义(P<0.05)。其中

4、，有2例患者，一例CD59缺失率为7.8%，FLAER缺失率为88.1%;另一例CD59缺失率为5.5%，FLAER缺失率为23.2%。　　2.3　不同方法对非PNH患者检测的比较　各组中FLAER缺失率平均值均大于CD59缺失率，但差异无统计学意义(P>0.05)，表明在非PNH组中FLAER和CD59检测无显著差异。对照组中FLAER缺失率为0.0%，特异性100%，有3例存在CD59缺失，缺失率均小于1%。13例AA患者中5例检测出FLAER缺失，其中4例检测出CD59缺失，1例未检测出;11例MDS患者中3例检测出FLAER缺失，其中2例存在CD59缺

5、失，1例CD59缺失率为0。结果说明FLAER检测比CD59检测更为敏感，特异性更好。　　3　讨论　　到目前为止，已经发现了20多种蛋白在PNH患者血细胞表面表达缺乏，其中红细胞膜上衰变加速因子(CD55)和反应性溶血膜抑制物(CD59)的缺失被认为是引起PNH病理生理的主要原因。红细胞数目多、抗体表达强是灵敏度检测最好的目标细胞。尤其是在一些粒细胞减少的疾病中如AA、MDS，红细胞检测尤为重要。同时，通过比较红细胞和白细胞的数值，可以给临床提供更多信息。CD55分子在红细胞上表达较低，而CD59分子的荧光染色强且均一，近些年来已成为PNH诊断的金标准。然而，越来越

6、多的研究发现检测红细胞CD59表达对PNH的诊断有一定的局限性。　　本研究发现，在PNH组的两例患者中，一例CD59缺失率为5.5%，另一例CD59缺失率为2.9%，而FLAER缺失率分别为23.2%和47.7%。可能是由于患者正处于疾病的活动期，接受输血治疗，影响了红细胞CD59的表达，导致CD59表达出现假阳性。有研究表明，在小细胞低色素性贫血时，病人的红细胞膜表面的CD59表达均有降低，但粒细胞是正常的，若只检测红细胞的CD59会造成其表达假阴性。此外，正常细胞衰老时表面分子CD59还有可能自发丢失，均可导致检测值偏离事实。随着技术不断进步，人们研究出了FLA

7、ER技术，FLAER是Alexa-488标记的无活性的嗜水气单胞菌溶素前体的变异体，可以特异性地与GPI锚链蛋白结合，在所有具有GPI锚连蛋白的粒细胞上均有特异性表达，不会因不同细胞表达GPI锚链蛋白的多少和种类不同造成误差。由于FLAER能直接检测GPI蛋白，有助于识别真正的PNH和免疫性血细胞减少症，明确真正的GPI阴性细胞。本研究中对照组FLAER检测缺失率均为0，与CD59相比检验结果更具有特异性;在PNH组中，FLAER的缺失率显著高于CD59，敏感性更高。FLAER也是防止门内出现污染细胞最好的抗体。如果门内污染了少量的CD24阴性表达的细胞群，可能