酶法与化学法相结合合成细胞

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1、吉林大学硕士学位论文保密级别：内部学位级别：理学硕士论文提交日期：2000年五月答辩日期：2000/6/9分类识别：Q55总页数：73开本：16开图表：有酶法与化学法相结合合成细胞粘和因子RGD的研究作者：张立强专业：生物化学与分子生物学导师：张学忠教授分子酶学工程教育部重点实验室吉林大学二OOO年六月1吉林大学硕士学位论文Master’sDegreeThesisSynthesisofCellAdhesiveFactor-RGDCatalyzedbyPorcinePancreasLipaseAuthor:ZhangLi-qiangMajor:BiochemistryS

2、upervisor:Prof.ZhangXue-zhongKeyLaboratoryofMolecularEnzymologyandEngineeringofEducationalMinistryJilinuniversityMay20002吉林大学硕士学位论文目录提要…………………………………………………………1前言…………………………………………………………2材料与方法…………………………………………………19结果与讨论…………………………………………………26一、化学法合成GD二肽的反应机理及最佳反应模型的建立……………………………………26（一）化学合成的机理

3、……………………………26（二）最佳反应的建立……………………………26小结……………………………………………….27二、脂肪酶催化的RGD及其前体二肽的合成………28（一）脂肪酶催化肽合成的反应机理…………….29（二）猪胰脂肪酶催化RGD三肽合成的研究及最佳反应模型的建立……………………30小结……………………………………………….41（三）猪胰脂肪酶催化合成RGD前体二肽的研究及最佳反应的建立…………………42小结………………………………………………50结论…………………………………………………….….52参考文献…….…….………………………………………55致

4、谢……….……………………………………………….61摘要………………………………...………………………ⅠAbstract…………………………………….………………Ⅴ3吉林大学硕士学位论文提要本研究采用化学法与酶法相结合的手段进行细胞粘合因子RGD三肽合成的研究。首先采用氯乙酰基保护天冬氨酸，然后进行氨解生成GD二肽，建立了一个简便、有效、经济的合成RGD前体二肽的模型。利用脂肪酶能催化肽键形成的特性，使用猪胰脂肪酶（PPL）催化合成RGD三肽，并研究影响肽合成的因素，着重解决亲水氨基酸/肽片段底物的溶解性与合成产率低的问题。采用有机溶剂-水混溶体系解决亲水性底物的溶

5、解性问题，发现脂肪酶PPL在该类体系中也有很好的溶解性，同时可以避免在水含量较大的反应体系中目的产物的二次水解。考察五种不同的混溶体系，确立了两种最佳反应体系，即：50%DMF，15℃，pH7.7，反应时间为6h，最大产率为76.4%；或50%DMSO，10℃，pH7.7，8h，最大产率为71.7%。结合PPL催化RGD前体二肽RG和GD的研究，我们首次较为系统地从理论上对各种因素对PPL催化肽合成影响机理作了分析。关键词：猪胰脂肪酶（PPL）RGD合成有机溶剂KeyWords:PorcinePancreasLipaseRGDSynthesisOrganicsolve

6、nt4吉林大学硕士学位论文前言§1.1生物活性肽（bioactivePeptide）生物活性肽是沟通细胞间和器官间信息的重要化学信使，通过内分泌、神经内分泌乃至神经分泌等方式行使微妙的信息传递功能，从而使机体组合成一系列高密度的控制系统，调节生长、发育、繁殖、代谢和行为等生命过程。不论是从结构还是功能来说,生物活性肽都是最复杂和多变的化合物，表1列出了部分肽的生理活性。[1-11]Table1ExamplesofphysiologicallyactivepeptidesPeptideclassResiduesActivityAntibioticpeptidesSubt

7、ilinUnknownInhibitsGram-positivebacteriaNisin34InhibitsGram-positiveandacidbacteriaLactocinS33ClostridiumbotulinumListeriamonocytogenesStaphylococcusaureusPediocinPA1UnknownSomelacticacidbacteriaListeriasp.NeuropeptidesLeu-enkephalin5OpioidMet-enkephalin5Opioidα-endorphin16Neur