血小板减少性疾病诊断

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1、血小板减少性疾病诊断-流式细胞仪法检测网织血小板(快速、敏感.特异、经济)血小板减少性疾病概述血小板减少性疾病无论其种类如何，从病理生理来说，只有三个机制：生成不足，破坏加速，血小板池异常。血小板池异常儿乎总是因为脾功能亢进，也仅仅在脾脏肿大的病人才会怀疑此种疾病。相对的是，血小板牛:成减少或破坏加速造成的血小板减少性疾病比较难以鉴别。最初检査血小板减少性疾病通常采用外周血和骨髓涂片，骨髓涂片从质量上来说町以鉴别发育不良造成的巨核细胞减少和大多数情况卜血小板破坏加速导致的巨核细胞增多。血小板体积分布、血小板表面结合免疫球蛋白IgG、血小板残片检杳是有用的辅助诊断。但这些方法有其缺点：骨

2、髓抽取和活检对病人來说是创伤性检查，结果判断主观影响大；血小板自身免疫球蛋口检测灵敏度髙，但特界性低(Haematologica2000;85:627-631)；板寿命检查耗时、患者接触放射线；所以需要寻找一种快速、非侵袭性实验帮助判断血小病减少性疾病的机制。流式细胞仪法检测网织血小板原理TO(唾岬橙)是一种核酸染料，由488nm激光激发，与RNA和DNA结合，结合后荧光强度增强3000倍，光量了得率高，并月•町以穿透活细胞细胞膜。网织血小板(RP)是循环屮最“年轻”的血小板，可以用流式细胞仪方法通过标记全血中或富含血小板血浆屮血小板RNA來检测。网织血小板增多是血小板牝成增多的标志。

3、RP检测对识别ITP和血小板牛成障碍很有意义。并11对多种病因造成的血小板减少的复朵病人也极有帮助。RP检测可评估化疗后骨髓抑制的恢复。町以监控各种血小板生成素的使用。流式细胞仪法检测网织血小板的医学评价徳国Minister人学临床化学和医学实验研究所及内科部用TO染色血小板并在流式细胞仪上分析发现，因为血小板破坏加速“受迫”纶成的血小板，其显著特征是血小板中残留RNA增多。正常人外周血RP细胞百分率为8.6+/-2.S%；血小板减少伴随骨髓有核细胞止常或增多病人RP显著升高，为26.9+/-10.9%；Ifll.小板减少同吋伴随血小板牛•成障碍的病人RP百分率与正常人比无明显差界，但

4、绝对数目明显降低。Miinster大学同吋认为，用流式细胞仪分析TO染色后的血小板对评价血小伴减少性疾病是非常有临床价值的辅助诊断，尤其是需要快速诊断以确定治疗方案时。这种方法灵敏度高，特异性好，并且简单，快速，对患者没有伤害(Blood,Vol75,No1(January1).1990:pp116-121)。耶鲁大学医学院用流式细胞仪法检测了ITP患者及化疗导致的血小板减少病人外周血中RP的比例，发现1TP病人RP比例明显升高，达38.6+/・27.4；化疗病人及正常人分别为7.2+L3.3%和2.9+/22%。认为在ITP诊断上，流式细胞仪法检测RP优于血小板自身免疫抗体检测(Ar

5、chPatholLabMed.1993Jun;117(6):606-10)。对化疗造成的血小板减少，耶鲁大学医学院的ChaoWang等认为，检测外周血网织血小板比例对以预测化疗后血小板的恢复时间，从而指导预防性的输血。这种全血方法快速、重复性好，对病人无害(Volume42Issue3,Pages368-374PublishedOnline:21Apr2002)oH本广岛人学页学院TeruhisaFujii等用流式细胞仪检测RP,建立了一种可检测严重血小板减少样木的方法(ThrombosisResearchVolume97,Issue6,15March2000,Pages431-440

6、)。研究实验性血小板减少和免疫性血小板减少性疾病时发现MPV(平均血小板容积)升高，同时发现TO阳性的血小板与MPV有直接的相关性。说明TO阳性的血小板由不成熟的血小板组成，反映了一定巨核细胞群血小板生成活动。据此，对恢复期免疫性血小板减少患者系列检测发现，TO阳性的血小板百分比，随着血小板数目的增多，逐渐恢复正常。血小板减少性疾病同时骨髓巨核细胞增多时，TO阳性的血小板绝对数冃显著降低，但百分比与对照样木比无明显差异。所以TO阳性的血小板的绝对数冃也是要考虑的因素。流式检测方法试剂：BDRctic-COUNT™ReticulocyteReagentSystem(产品号：349204)

7、样本：EDTA抗凝外周血样本制备：1.取两支试管，分别标为检测管和对照管。2.在对照管中加5U1抗凝全血,lmlBDRetic-Count检测试剂，室温避光孵育2.5小吋。1.在对照管中加5P1抗凝全血,1ml含2mmol/LEDTA>0.02%叠氮钠的PBS,室温避光孵育2.5小时。2.上机检测。3.FSC/SSC采用对数坐标，设血小板门，至少收集5000个血小板。4.TO发射波长在FL1通道检测。FL1采用对数坐标。根据对照调整电压并设ma