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1、MW原体诊断技术研究进展【关键词】解淼豚原体诊断技术解豚麻原体(Ureaplasmaurealyticum,Uu)是属于柔膜纲支原体目支原体科的支原体属的微生物。目前，解淼淼原体可分为两大生物群和14个血清型，生物群1或Parvo,包括血清型1、3、6和14;生物群2或T960,包括其余的10个血清型［1,2］。但各型与疾病关系尚未明确。Uu除可引起非淋球菌尿道炎外还与许多泌尿生殖道疾病相关。Uu的感染是绒毛羊膜炎的病因，并且和胎儿的羊膜早破、早产、围生期病态和病死率相关［3］。此外，它还是引起呼吸系统疾病和脑膜炎的重要因素［4］。近年来，Uu作为主要病原体的报道增多，但
2、是许多感染者临床症状不典型，因此，早期、简便、快速，特异地诊断Uu,对临床的诊断、疾病的早期治疗和预防其流行等具有重要的意义。目前，对解淼腺原体的诊断方法主要有培养法、免疫学法和分子生物学法。1培养法支原体是介于细菌和病毒之间的一类缺乏细胞壁的微生物，能在人工培养基上生长，但营养条件要求较高，一般有液体、固体和双相培养法。Uu的液体培养主要是以牛心浸出液、肉汤培养基为基础，添加10%〜20%小牛血清或马血清、酵母、0.1%尿素、抗生素、抑菌剂和酚红指示剂等［5］。支原体中，仅Uu在生长的过程中会分解尿素，产生NH3,使培养基颜色变红。因此可通过观察培养基颜色的改变来判断U
3、u的存在。涂少华等［6］改进培养基营养组成，调整营养结构,改善抑菌能力。改良的培养基同原Uu液相培养基相比，具有分离阳性高、生长速度快及抑制杂菌能力强等优点。虽然肉汤颜色的变化在一定程度上已经提示了支原体培养可能为阳性,但是仍然存在着假阳性问题［7］。细菌和真菌的污染均会影响检验结果，因此还需转种琼脂固体培养基，观察典型的菌落形态和有关生化反应［8］。在接种后第1~3天出现的圆形棕色菌落,直径在15〜60juim,判断为Uu;若接种第3〜4天出现油煎蛋样菌落，直径为200~300Mm,判断为人型支原体(mycoplasmahominis,Mh)。故Uu的分离和鉴定要包括肉
4、汤增菌和转种固体平板。李婷等［9］改进固体培养基:含有多豚等基础营养成分和0.9%琼脂，增加血清含量,添加细胞培养液促进支原体生长；抑菌剂除传统的青霉素外还添加了非抗生素类抑菌成分，操作简便，污染率低。Uu的液体培养法设备简单、经济，但存在假阳性和假阴性的结果，还需固体培养鉴定。其耗时长，操作技术高，培养基复杂等一系列因素并不利于早期的临床快速、特异诊断。2免疫学法代谢抑制试验，根据特异性抗体能阻止支原体生长及代谢这一特性,对支原体采用发酵抑制试验进行血清抗体测定。血清中有特异性抗体存在时，加入血清的培养基中支原体的生长及代谢受到抑制，间接的阻止培养基的颜色改变［10］。
5、单克隆或多克隆免疫荧光法（IFA）和酶免疫实验（ELISA）:Fedoua等［11］对97株Uu进行实验，ELISA法则其中86株可进行分型鉴定，IFA法，则89株可进行分型鉴定，86株两种方法都可以，并认为ELISA比较合适用于临床诊断分型。如不能用ELISA则再用IFA补充实验。邹先彪［12］用夹心法检测Uu抗原并与传统的培养法相比较，结果ELISA夹心法敏感度为92.6%,特异度为97.4%,最低能够检测出蛋白含量为5~10ng/ml的Uu抗原。另外，国外部分文献报道了ELISA在Uu诊断中的应用，显示了其良好的发展前景［13］。还有斑点测试法［14］和后来发展起来
6、的快速检测抗原的免疫组化法［15］,即亲和素-生物素-酶复合物技术（ABC法）检测Uu临床感染者。该法简便快速（3h左右），不需要特殊的设备,标本处理后可长期保存等优点，在临床诊断中有实用价值。虽然免疫学法还未成为标准的Uu诊断技术，并且检测中也受多种因素的影响，但其快速、简便、灵敏度高、易于标准和商品化等优势,使其在临床快速检测上具有很好的发展前景并易于开发成商品化试剂盒。3分子生物学方法虽然培养法是Uu检测的“金标准”，但耗时长、敏感性低、易污染等缺点，使得近年来聚核酶链式反应(PCR)法渐渐显现了其在检测上的优势。研究者根据Uu的MB基因，16SrRNA基因和麻酶基
7、因设计了各种PCR检测方法［16］,如传统PCR、实时PCR、荧光定量PCR、反相斑点杂交、多重PCR等。Jongyoun等［17］以Uu的豚酶基因为靶基因，设计了两个生物群的共同引物(UU-1524R:5'-TTCCTGTTGCCCCTCAGTCT-3candUU-1613F:5c-AAGGTCAAGGTATGGAAGATCCAA-3°)和两个生物群的特异探针TaqManprobes(UU-parvo:54-FAM-TCCACAAGCTCCAGCAGCAATTTG-TAMRA-3，andUU-T960:5C-VIC-ACCA
