艾滋病的实验室诊断方法

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1、科研方法学班级：2008级研3班学号：2008128姓名:段治华艾滋病的实验室诊断方法段治华(山西医科大学，太原030001)摘要:艾滋病是由人类免疫缺陷病毒感染引起的传染病，实骑室检测是诊断艾滋病的主要手段，检测项目包括HIU抗原和抗体检测，病毒载量检测，CD4T淋巴细胞检测，IIIV耐药性检测，基因芯片技术的运用，病毒分离等。近年来，基于分子生物学和免疫学方法的发展，HTV的实验室检测有了较大的进步，为艾滋病的准确诊断提供可靠的方法。关键词：艾滋病HIV实验室诊断艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(AcquiredImmun

2、odeficiencySyndrome,AIDS)的英文音译，由人类免疫缺陷病(humanimmunodeficiencyvirus,HIV)感染引起的以免疫功能缺陷为主要特点的传染病⑴。目前在我国，艾滋病的流行已进入快速增长期，要有效地预防和控制艾滋病的流行，必须有可靠的诊断方法快速准确地诊断艾滋病。冃前，艾滋病的诊断主要依靠实验室检测方法，近年来,基于分子生物学和免疫学方法的发展，IIIV的实验室检测有了较大的进步。现简单叙述目前采用的实验室诊断HIV的方法。1HIV结构特点人类免疫缺陷病毒(HIV)外型呈球形或卵形，

3、直径90〜130nm,病毒特有的蛋白质附着于一薄层类脂质构成其包膜。核心含有两条相同拷贝的RNA链，外周核膜由多种蛋白质形成。HIV属逆转录病毒，基因组中存在三个大的开放读框，其顺序是gag-pol-envoGag基因编码55KD的前体蛋白，在病毒成熟过程中,被pol基因编码的蛋口酶加工，分别产生核心蛋白P17、核壳蛋白P24和核酸结合蛋白P15。P24是核壳组成蛋白，构成病毒的核衣壳，它的结构比较稳定，是HIV-1型的特异性蛋白。在HIV-2与P24对应的是主要核心抗原P32,为HIV-2型病毒感染的特异标志。Env编码

4、包膜蛋白，由外膜糖蛋白gpl20和跨膜糖蛋白gp41组成(在HIV-2型病毒中与之相当的是gpllO/130和gp36)叭2HIV抗原检测检测P24抗原可作为早期特界性诊断，因为在HIV感染的早期，血中未出现HIV抗体，血P24抗原常以低水平出现，但是该抗原检出率远比HIV抗体为低，因为HIV抗原岀现不久即可产生抗体，抗原抗体以复合物形式存在，而游离很少。在感染后期，抗原再度升高，可作为HIV活动性感染的标志。P24抗原检测方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫(RIA)、免疫荧光技术(IFA)、免疫吸附电镜(IS

5、EM)等，其中ELISA操作简单、经济、省时高效的实验方法，具有良好的敏感度和特异度⑵。HIV抗原检测的灵敏度约50%〜80%,所以该结果只能作为IIIV感染的辅助诊断依据⑶。2HIV抗体检测3.1酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA为HIV抗体初筛最常用的筛检方法，其试剂已经发展到第4代⑶。3.2凝胶颗粒凝集试验(PA)此法快速、简便，适合对少量标本的检测，但是灵敏度和准确性不如ELISA法⑴。3.3金标快速反应试验将颗粒凝聚法的简便性和酶免疫测定(EIA)技术相结合，用于快速检测抗-HIV,特异性较好，试剂稳定，检

6、测时不需要任何设备，快速简便，适用于应急检测以及边远地区检测⑴。3.4尿液HIV抗体检测尿液检测已成为艾滋病检测的一种全新手段，在安全、便捷等方面更具优势。HIV感染者的尿液、唾液、精液及泪液中均含有HIV抗体，其HIV抗体主要成分为IgG'3]o3.5免疫斑点印迹试验(westernblot,WB)此法被称为抗-HIV检测的"金标准”。是将HIV病毒蛋白通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的蛋白带分离开来，再把这些已经分离的不同蛋白转移到醋酸纤维素膜上，再将此膜切割成条状，每一条醋酸纤维素薄膜上均含有经

7、电泳分离过的HIV病毒抗原。待检血清样本用稀释液稀释成1：100,把它直接加到醋酸纤维素膜上，恒温振荡，使其充分接触反应。血清中若含有抗-HIV,就会与膜条上的抗原结合，冲洗除去多余的抗体，再加入抗人-IgG酶结合物并孵育，经洗涤后加入底物，有反应的抗原抗体结合带呈现紫褐色，根据出现条带情况判定结果⑴。3.6免疫荧光将HIV感染的细胞作为抗原固定在玻片上，滴加待检血清，若含有HIV抗体，则与细胞膜上的病毒抗原结合，清洗后加荧光标记的抗人IgG,细胞膜染色为HTV抗体阳性。此法操作简便，敏感性及特异性均较ELISA法高，但存

8、在对某些血清非特异性荧光难以去除，结果判断需较高级的荧光显微镜等缺点叫3.7放射免疫沉淀试验用同位素标记的HIV蛋白与待检血清反应，若血清中含有HIV抗体即可与HIV蛋白抗原结合，再加入葡萄球菌蛋AA,经低速离心，然后将沉淀复合物分离后电泳，放射自显影观察同位素标记蛋白带即可判定。本法灵敏度和特异度均好