生物分析复习(精品)

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1、电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象。原理：电泳技术就是利用在电场作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子木身人小、性状等性质的差异，使带电分了产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯。迁移率与带电分子所带净电荷成止比，与分子的大小和缓冲液的黏度成反比。电渗是一种液体相对于带电管壁移动的现彖。水合离子引起的流体整体移动。是毛细管内液体及其中所有组分共有的现象，包括溶剂、各种溶质(带电离子与中性分子)电渗流(electroosmoticflow,EOF)是指在毛细管屮，体

2、相溶液在轴向直流电场的作川b发生的定向运动。任何两个不同的物相接触都会在两相间产生电势，这是因电荷分离引起的。两相各冇过剩的电荷，电量相等，正负号相反，相与吸引，形成双电层。电泳淌度的定义及影响因子电泳淌度(ElectrophoreticMobility)是单位场强下离子的平均电泳速度。因为电泳速度与外加电场强度冇关，所以，在电泳中常用淌度而不用速度来描述荷电离了的电泳行为和特性。带电粒子的电泳淌度在一定条件下取决于粒子本身的性质，即与其所带电量成正比;与其半径及介质粘度成反比。区带电泳(CZE)分离硝基酚位置异

3、构体的分离原理、运用CZE分离硝基苯酚异构体随着迁移速度不同，逐渐形成样品谱带，依次在检测窗口被检测硝基苯酚的电离岂管胆泳区带魁泳法分誇邻硝基苯騎7J2I可硝基苹盼a对殆基苯酪7J5硝导酚的胆君pKa对场作用力aFcAIB泳速度对＞邻＞祠电离后，硝基苯酎负电荷含量►qIMIZi硝基苯酣受电电渗速度不变a合对＜^3*O出峰砺：員、孤对等速电泳的分离原理及特点等速现象：电泳静态达到后，被分离的离子淌度按顺序性梯形递减。1.将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子（充满毛细管）和尾随离子（置于一端的电泳槽小），试样离

4、子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。2.前导电解质的迁移率高于任何样品纟R分，示者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质Z间的空隙中移动，实现分离。特点：界面明显，富集、浓缩醋酸纤维素薄膜电泳的分离原理及操作流程分离原理：任何一种物质质点，由于其本身的解离作用或由于其表面上吸附了其他的带电质点,在电场中，便会向一定的电极移动。依据物质因所带的电荷引起的移动的速度和方向不同,不同物质得到分离。醋酸纤维薄膜电泳是区带电泳的一个重要分支，

5、它以醋酸纤维薄膜为支持介质。醋酸纤维索是纤维索的醋酸酯，由纤维索的矩基经乙酰化而成。它溶于内酮等冇机溶剂，可涂布成均一细密的微孔薄膜，即酷酸纤维素膜（celluloseacetatemembrane,简称CAM）。实验操作步骤（1）预处理膜的准备：根据分离样品的多少将醋酸纤维薄膜裁切成合适的大小，在膜片无光泽的一•而上用铅笔轻轻划一条加样线。加样线可选在距膜片一端2〜3cm处，冇时也可选在膜片的中央线附近。膜片浸透：在一浅碟或培养皿中倒入所选择的缓冲液，将膜片小心地浮铺在缓冲液面上，将膜片的的无光泽而朝Fo膜片的

6、底而吸收电极缓冲液后逐渐下沉，直至电极缓冲液将膜片完全浸透。膜片在电极缓冲液完全浸透后，用钝头锻子取出，稍稍用滤纸吸去多余的缓冲液，然后将膜片夹在两层滤纸ZI'可吸于多余的缓冲液，但不能吸得过干而出现不透明的白色部分。（2）加样川铅笔在薄膜无光泽面一端2cm处画一细线，加样时平稳地前后或左右来回移动加样器，于细线处加样。毛细管、微最吸管、微最注射器或印模都可以用来加样。线型加样醋酸纤维膜上的样品线条宽度不应超过4mm,样品线与膜片上边边缘Z间的距离一般为3〜5mm。样品的加样量或加样体积随样品的浓度、染色和检测方

7、法等条件的不同而有较人的变化。(3)电泳电泳前，先用钝头银子将加过样的膜片安放在电泳槽的支架上，膜片两端约0.5〜1.0cm的部分应与支架的顶面紧贴，膜面尽可能不与手指直接接触，以免膜面受到污染。如果在同一电泳槽内同时安放几张膜片，应避免相邻膜片之间彼此接触。在电泳槽的两个电极室内注入适量的电极缓冲液，用3~4层滤纸作盐桥。膜片的两端分别用滤纸盐桥盖住，以此将膜片拉平固定并使电流通过。盖上电泳槽盖，让膜片在电泳槽内水平静置平衡10分钟，然后将电泳槽的两个电极与直流电源的正负极分别相接。(4)染色染色剂要求：不应溶

8、解醋酸纤维薄膜一般蛋白质的染色方法氨基黑10B染色：酸性染料，•其磺酸基与蛋白质反应构成复合盐，是最常用的蛋白质染料。丽春红S方法：是一种水溶性的阴离子重氮染料，带负电荷的丽春红分子与正电荷的蛋白质氨基基团结合，也可以非共价键形式与蛋白质非极性区域结合，显示红色蛋白条带。用3%三氯醋酸呢制0.2%丽春红S溶液，将干燥的膜片浸入此染色剂中。染色时间不盂要严格控制，但一般染色