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1、喪术油脂质体制备工艺的考察高效液相色谱仪Watersl525WH-90A微型旋涡混合器KQ-400KBV高功率数控超声清洗器HJ-5多功能搅拌器FA2004电子分析天平（分度值O.lmg）1.2材料磷酸二氢钾氢氧化钠氯仿甲醇卵磷脂胆固醇乙鷹犍牛儿酮对照品（111665-200902）葡聚糖凝胶G-50莪术油2方法与结果2.1空白脂质体对分析结果影响考察美国Waters公司上海振荣科学仪器有限公司昆山市超声仪器有限公司常州国华电器有限公司德国赛多利斯国药集团化学试剂有限公诃国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司国药
2、集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司中国药品生物制品检定所（纯度98.8%）北京拜尔迪生物公司实验室自制精密量取空门脂质体0.5ml于10ml容量瓶屮，加入甲醇定容至刻度。精密量取空白脂质体溶液0.1ml于10ml容虽瓶中，加入甲醇定容至刻度。液相色谱条件同2.1.2：检测波长为216nm,测定结果见图3.1。精密称取協牛儿酣对照品20mg,加入10ml甲醇溶解，定容至刻度得A标准溶液；精密堪収握牛儿酮人标准溶液0.5ml,置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，得B标准溶液；再将密量取犹牛儿酮B标准溶液0.8mL
3、,置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到浓度为&0憾/边的C标准溶液。収20plC标准溶液进样，液相色谱条精密量取空门脂质体0.5ml于10ml容量瓶屮，加入甲醇定容至刻度。精密量取空白脂质体溶液0.1ml于10ml容虽瓶中，加入甲醇定容至刻度。液相色谱条件同2.1.2：检测波长为216nm,测定结果见图3.1。精密称取協牛儿酣对照品20mg,加入10ml甲醇溶解，定容至刻度得A标准溶液；精密堪収握牛儿酮人标准溶液0.5ml,置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，得B标准溶液；再将密量取犹牛儿酮B标准溶液0.8mL,置于10ml容量
4、瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到浓度为&0憾/边的C标准溶液。収20plC标准溶液进样，液相色谱条件同2.1.2,检测波长为216nm,测定结果见图3.2。图3.2犍牛儿舸液相色i?l分析图谱由图3」和图3.2可知，吸收波长在216nm卜•空门脂质体不会对擁牛儿酮的检测产生显著干扰。2.2磷酸盐缓冲液(PBS,pH=6.5)的配制旳称取磷酸二氢钾0.689,加O.lmol/1的氢氧化钠溶液15.2ml,用水稀释至100ml即得。2.3莪术油脂质体分离与包封率和载药量测定脂质体的分离方法冇透析法、凝胶过滤法和离心法【列。本试验考察了凝胶过滤法來测定
5、药物包封率。2.3.1凝胶的选择采用凝胶过滤法分离我术油脂质体和游离药物测定包封率，国外选择的凝胶范用较广，不同交联度的简聚糖凝胶均有应用.木实验采用较常用的SephadexG・50对游离药物和技术油脂质体进行分离。2.3.2洗脱液的选择莪术挥发油中主耍有效成分是大量的倍半话类药物，分子中的内酯坏是只有抗肿瘤活性的必要结构，其存在具有pH依赖性，当pH>7时易开环形成竣酸形式，因此选择pH为6.5的PBS缓冲液为洗脱液"401.2.3.3葡聚糖凝胶柱的制备称取一定届葡聚糖凝胶SephadexG・50（约2g）,经pH6.5的PBS溶胀12h,装于1
6、.5x25cm的玻璃层析柱中制备凝胶柱，装柱高度为15cml4,Jo234洗脱曲线绘制用pH6.5的PBS平衡层析柱，粘密量取技术油脂质体lml上柱，用PBS洗脱，流速控制在1.Oml/min左右，用带有刻度的试管每隔1ml收集一管，总共收集50管，每份均用甲醇稀释至10ml,在216nm下进样，根据蜂面积绘制流出曲线。见图3.3。图3.3莪术油脂质体的流出曲线根据流岀曲线可知，游离的药物在24ml怎右开始流出，与之前的脂质体部分实现了较好的分离，便于进一步准确测定游离药物的量。2.3.5柱回收率分别配制高、中、低三种不同浓度的拢牛儿酗标准液，取l
7、ml分别上柱,在上述2.3.4条件卜•洗脱，然后收集游离的药物组分，进行稀释，定容，在216nm波长下进行测定，计算犍牛儿酮柱回收率，结果见表3.1。表3.1凝胶柱冋收率测定结果(X士s,n=3)加入槌牛儿酮浓度(pg/ml)测得犍牛儿酮浓度(pg/ml)回收率(％)RSD%1.00.988^0.4198.800.414.04.008±0.35100.200.358.07.898土0.5298.720.52山表3.1可知，凝胶柱平均回收率是99.24%,表明葡聚糖凝胶对犍牛儿酮的吸附能力很小，可以认为药物能被完全洗脱。2.3.6加样回收率分别配制高
8、、中、低三种不同浓度的犍牛儿酮标准液，向其中分别加入空白脂质体,得到混合液，取lml上柱，在上述2.3.4条件下洗脱，然后
