毕业论文(李颖)

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1、毕业论文(李颖)学号：14083400784毕业设计(论文)题口：HCV核心区基因片段(C70J40)的原核表达作者:李颖届别：2012届系别：化学化T学院专业：生物丁•程指导老师：聂东宋职称：副教授完成时间：2012年5月20R摘要在大肠杆菌中表达HCV核心区基因片段(C70-140),构建一个pBVIL-70-140原核表达载体，用于丙型肝炎核心抗^(HCV-cAg)和内型肝炎抗体(HCV・Ab)联合检测。通过逆转录PCR扩增HCV核心片段，RT-PCR产物经Xhol和Xbal双酶切后连接到经同样酚切的pBVIL原核表达载体中，转化人肠埃希氏菌BL21,并以IPTG诱导蛋

2、白表达，SDS-PAGE鉴定。结果表明，将目的基因与表达载体pBVIL进行连接，得原核表达载体pBVIL-70-140,该载体转化人肠埃希氏菌BL21后可诱导表达出分了屋约为25KD的重组蛋白。关键词：丙型肝炎病毒;核心区基因片段(C70-140)；原核表达I湖南理工学院本科毕业论文AbstractAbstractTheobjectiveistoexpresstherecombinantHCVcoregenefragment(C70・140)inEscherichiacoliandbuildapBVIL-70・140prokaryoticexpressionvectorfor

3、thehepatitisBcoreantigen(HCV-cAg)andhepatitisCantibodies(HCV-Ab)combineddetection.HCVcorefragmentwasamplifiedbyRT-PCRandtheproductwasdigestedbyXholandXbal,thenthefragmentwasinsertedintoanEscherichiacoliprokaiyoticexpressionvectorpBVIL,andusedtotransformE.coliBL21.Thetargetproteinwasexpresse

4、dinBL21andinducedbyIPTG,andtheexpressedproteinwasindentifiedbySDS一PAGE.WegotthepBVIL-70・140prokaryoticexpressionvectorbyconnectingthepurposegeneandexpressionvectorpBVIL,theresultshowedthatthepBVIL-70-140prokaryoticexpressionvectorcaninducetheexpressionoftherecombinantproteinmolecularweighto

5、fabout25KDthroughthetransformationofEscherichiacoli.Keywords:HCV;Coregenefragment(C70-140);Prokaryoticexpression湖南理工学院本科毕业论文冃录目录中文摘要I英文摘耍II一、材料与方法31、材料31.1实验仪器31.2实验卿及主要试剂31.3试剂盒41.4分子量标准41.5弓I物41.6菌株和载体41.7实验血浆42、方法42.1主要溶液配制42.2培养基配制52.3丙型肝炎病毒RNA提取62.4引物设计62.5逆转录成cDNA62.6PCR扩增目的基因62.7载体质粒

6、DNA与目的基因DNA的制备及酶切72.8质粒大片段及目的基因片段的分离回收与纯化72.9目的基因片段•载体连接82.10BL21感受态细胞的制备82.11转化2.12重组克隆的筛选及鉴定92.13璽组蛋白的表达与纯化9二、结果11三、讨论14参考文献16致谢18附录19湖刖H南理工学院木科毕业论文-AZ-*刖.亠.丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肝炎和肝癌的主要病原体之一，感染HCV之示，约有50%〜85%的受染者成为慢性携带者；感染后20年，约有20%左右的感染者发生川硕化；而一口发展成为肝硬化，HCV相关的肝细胞癌每年的发生率为1%〜7%：而且F1前尚无有效的疫苗可以预防感

7、染［1-3］0因而丙型肝炎给患者带來极大的健康负担和经济负担，己成为一个严重的社会和公共卫牛问题。丙型肝炎呈全球性流行，平均HCV感染率在3%左右，全世界约有1.7亿的HCV感染者［4］,所感染的HCV基因型主要包括9种。我国-•般人群的抗-HCV阳性率为3.2%,与世界平均水平接近，HCV基因型以lb和2a为主，其中lb型占到70%以上。HCV基因组是一个单股正链的RNA分子，HCV利用依赖于RNA的RNA聚合腮复制其基因组，在结构上可以分为三个区：5'端的非翻译区(5‘・UTR,untranslat