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1、狐狸主要消化酶变化规律的研究小肠是碳水化合物、蛋白质及脂肪等营养物质的主要消化场所。小肠液中消化酶的活性可能是影响采食、消化及生长的主要限制因素［1-2］。在研究胃肠道消化酶的试验屮，由于消化液的分泌、胃肠道的蠕动等环境温度［3］及摄食行为［4］的影响，消化酶的活性呈现某些规律性波动。胃肠道的消化能力在狐的生长过程中起着极其重要的作用。但是，仔狐在前期消化能力很有限，原因是消化道发育不成熟和消化酶分泌不足，只能靠母乳提供牛长所需的营养物质。木文通过对不同断奶日龄仔狐在断奶前后主要消化酶活性测定，探讨不同日龄仔狐酶活发
2、育规律，从而为仔狐营养需要奠定理论基础。1•试验材料和方法1.1试验动物试验动物采用相同饲养管理条件下、发育正常、健康的初生(1d),7d、14d、21d、28d、35d、42d的蓝狐和银狐(每日龄各4只)，所有试验动物均由唐山市狐狸养殖场提供，集屮屠宰。样品采集制备依照Owskzy的方法修改完成。开腹后立即结扎幽门瓣、回盲瓣、月夷腺管，以防止样品相互污染，摘取牒脏，剥除脂肪组织和结缔组织；取含内容物的各肠段，将其中的内容物和肠粘膜刮出样品放入液氮屮速冻，-70°C冻存备用。1.2样品前处理肠内容物：取岀冷冻的小肠内
3、容物，自然解冻后，肠道食糜按WN二1/5加入冰上预冷至4°C的去离子水，匀浆，匀浆玻璃管外设冰浴，匀浆液用冷冻离心机4°C12000r/min离心15min(5ml),取上清液等分成若干份贮存在-30°C冰柜屮保存，以备进行酶活性分析。胰脏：解剖后在冰盒冷却的铁板上迅速截取膜脏，生理盐水冲洗后干纱布蘸干水分，秤重并记录，立即放入液氮速冻后，转移至-70°C保存。膜腺上清液的制备:从冰箱中取岀的膜腺，用其重量的11倍体积的4°C的去离子水匀浆45秒，匀浆玻璃管外设冰浴。匀浆液在4°C下离心15Smin(16000r/m
4、in),将上清液置-20°C下保存，用于酶活性测定。胰腺酶原的激活：配制0.05mol/lTris-HCL(pH=7.10)的缓冲液，内含有0.05mol/LCaCL2o将肠激酶溶解在Tris缓冲溶液中配成0.1%的肠激酶-Tris缓冲液，在胰腺组织上清液中加入等体积的肠激酶一Tris缓冲液，370C温浴lh。即可激活胰蛋白酶原和糜蛋白酶原［5］o1.3实验项目肠道各段内容物及胰脏淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶、胃蛋白酶、乳糖酶、蔗糖酶和麦芽糖酶活性。1.4测定方法及酶活定义酶活定义及标准曲线的制备及具体测定方法见附录。1
5、.4.1淀粉酶的测定依照Bernfeld的方法改进后完成。用移液管将0.lml小肠液移入一试管，并在水浴中调温至38°C,加入0.lml已同样预热至38°C的底物溶液（1%淀粉磷酸缓冲液，pH6.9）,3分钟后加入0.2ml显色剂溶液（含3,5-二硝基水杨酸），终止反应，置试管于沸水浴中5分钟，冷水流冷却后加2ml蒸憎水，用分光光度计于540mn处以空白为参比测定吸光度。用0・lml蒸憾水代替小肠液测定空白值。1.4.2胰蛋白酶的测定依照Bernfeld的方法改进后完成。用移液管将lml底物缓冲液（底物为苯甲酰-精氨
6、酸-P-硝基苯钱盐酸盐（BAPNA）,缓冲液为0.005mol/LTris缓冲液，内含CaC12,ph7.8）移入一试管，加0.18ml蒸馆水，38°C水浴5分钟，加0.02ml小肠液，38°C水浴60分钟，用30%乙酸终止反应，在410nm处以空白为参比测吸光度。用0.2ml蒸馅水代替小肠液测定空白值。1.4.3胰糜蛋白酶的测定测定方法同胰蛋白酶。特异性底物为GPPNA（Sigma,62505）。1.4.4脂肪酶的测定取100ml三角瓶4个,每瓶加入lml0.025mol/L磷酸盐缓冲液和0.8ml聚乙烯醇橄榄油乳
7、化液，至38°C水浴中保温5min,然后在两个瓶屮各加入小肠液0.2ml,从加入小肠液开始精确计算时间，继续保温15min,取出后立即加入95%乙醇3ml,以停止酶作用,加入2滴酚酥指示剂,用0.005mol/lNaOH标准液进行滴定。另外两个瓶子不加小肠液，也继续保温15min后，立即取出，各加入3ml95%乙醇，然后加入0.2ml小肠液，用0.OOSmol/LNaOIl标准液进行滴定,作为对照。1.4.5胃蛋白酶的测定使用南京建成试剂盒进行测定。1.4.6二糖酶的测定使用南京建成试剂盒进行测定。1.5数据处理数据
8、用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析，采用Duncan法进行多重比较。2.1幼狐不同FI龄各部位淀粉酶活性变化2.试验结果日胰腺十二指肠空肠回肠龄蓝狐银狐蓝狐银狐蓝狐银狐蓝狐银狐Id64.14±1319.61+4.210.15±2.11.96+1.36.74+7.30.63+529.24+9.54.42+1.27"6a05a26a26a
