半乳糖苷酶酶活酶的固定化毕业

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1、摘要摘要从土壤中筛选出一株产β-半乳糖苷酶的枯草芽孢杆菌，并对菌株和其产生的β-半乳糖苷酶进行了测定。单菌落的最佳生长时间是10h，最佳接种量是2.0%，最佳培养时间24h；该菌株产生的β-半乳糖苷酶的最适pH是6.5，最适生长温度为37℃，酶的稳定性较高，4h后相对酶活仍能维持85%以上；Mg2+对酶活性的促进作用最强，当浓度为10mmol/L时，酶活力可达112.24％，Cu2+对酶活性抑制作用最强，少量Cu2+（1mmol/L）就可使酶失活。本实验还进行了β-半乳糖苷酶的固定化实验。以海藻酸钠为栽体、戊二醛为交联剂，

2、对乳糖酶进行固定化。研究了海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、戊二醛浓度、固定化时间对酶固定化的影响，并对固定化酶酶促反应的最适pH、温度等进行了测定。结果表明，4％的海藻酸钠，在温度37℃、pH6~7、氯化钙浓度1％、戊二醛浓度0.1%下对乳糖酶的固定化率最高。酶促反应特性测定结果表明，固定化后乳糖酶的稳定性增强，最适温度范围较非固定化乳糖酶大，最适pH范围与非固定化乳糖酶大致相同。但固定化酶珠体机械强度较差，尚待改进。关键词：β-半乳糖苷酶酶活性酶的固定化IAbsractAbsractAstrainisolatedfromsoi

3、linproducingβ-galactosidaseofBacillussubtilis,andstrainsandβ-galactosidaseweremeasuredwhichproduces.Asinglecolonyofthebestgrowthtimeis10h,thebestinoculumwas2.0%,thebestculturetime24h;optimumpHβ-galactosidaseenzymeproducedbythisstrainis6.5,theoptimumtemperatureis37

4、℃,enzymehighstability,4haftertherelativeactivitycanbemaintainedabove85%;Mg2+ontheactivityofpromotingthestrongest,whentheconcentrationof10mmol/L,theenzymeactivityofupto112.24%,Cu2+inhibitionofenzymeactivitymost,asmallamountofCu2+(1mmol/L)caninactivatetheenzyme.Thee

5、xperimentswerealsoβ-galactosidaseimmobilizationexperiments.Thelactasewasimmobilizedonsodiumalginatecarrierbycross-linkwithglutaraldehyde.Theeffectsofflutaraldehydeconcentration,amountoftheenzymeandtemperatureimmobilizationwereanalyzed.Thereactionconditions(optimun

6、pHandtemperature)oftheimmobilizedlactasewerestudied.Theresultsshowthatthehighrecoveryrateofimmobilizedenzymecouldbeobtainedundertheconditionsof0.1%glutaraldegyde,4%sodiumalginateand37℃temperature.Keyword:β-galactosidase,enzymesactivity,ImmobilizationofenzymeI目录目录摘

7、要IAbsractII目录III第1章绪论11.1研究背景11.2课题研究目的和意义21.3国内外研究现状和发展趋势21.4β-半乳糖苷酶的来源及其特性41.4.1细菌产生的β-半乳糖苷酶41.4.2酵母菌产生的β-半乳糖苷酶41.4.3霉菌产生的β-半乳糖苷酶41.5β-半乳糖苷酶在食品工业中的应用51.5.1水解牛乳和其它乳制品中的乳糖51.5.2生产低聚半乳糖(Galactooligosaccharide)61.5.3分析食品中乳糖含量71.5.4β-半乳糖苷酶在制药工业中的应用71.5.5β-半乳糖苷酶在酶联免疫反

8、应(EIA)中的应用7第2章材料和方法82.1材料82.1.1材料与试剂82.1.2仪器与设备82.1.3培养基82.2产β-半乳糖苷酶菌的筛选92.2.1菌株筛选方法92.2.2分离纯化92.2.3菌种生理生化鉴定92.2.4β-半乳糖苷酶粗酶液制备92.2.5邻硝基苯酚（ONP）标准曲线92.2.6