（浙江选考）2018版高考生物总复习第9单元生物技术实践第33讲微生物的利用

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1、第33讲微生物的利用【考纲耍求】1.大肠杆菌的培养和分离(加试)。2.分离以尿素为氮源的微生物(加试)o考点一微生物的培养和分离fl知识梳理夯实基础突破要点1.大肠杆菌(1)特性：人肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一燉对人无害，但若进入人的泌尿系统,就会对人体产生危害。⑵用途：是基因工程技术小被广泛采川的工具。2.细菌的培养和分离(1)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖,分裂速度很快，约20min分裂一次。(2)培养的方法：需耍将已有细菌的培养物转移到新的培养基小，-般用接种环(工貝)转移带菌的培养物。

2、(3)细菌分离的方法与特点分离方法特点划线分离法操作简单涂布分离法操作复杂，单菌落更易分开3.消毒和火菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体农面或内部•部分对■人体有害的微生物(不包括芽他和他子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所冇的微生物，包括芽他和他了灼烧灭菌、干热灭菌、fi压蒸汽灭菌4.大肠杆菌的培养和分离实验(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,培养后再在LB固体平而培养基上划线进行分离,随后培养基上

3、就会形成一个个单独的菌落。(2)实验步骤培养基灭菌50mLLB液体培养基和50ml,LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将培养基分别倒至4个火菌后的培养111L屮，水平放置，使之形成平面倒平板!接种!划线分离!培养观察在装有液体培养基的三角瓶屮接种人肠杆菌，培养12h用接种环在接种有人肠杆菌的三角瓶屮蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养血培养皿倒置（盖在下面），放在37°C恒温培养箱中培养12〜24h后,可看到划线的末端出现不连续的单个菌落（3）大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛

4、选高表达量菌株的最简便方法之--。5•微生物接种的两种常用力法比较比较划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养慕表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而來的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液屮•，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂些冃的使培养

5、基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落【思考诊断】1.连线无菌技术的方法、类型及対象对彖（D灼烧火苗⑥爲压蒸汽灭宙类型②「热火伯③巴氏消產④紫外线⑤化学药物I•接种针（环）II.培养IIILIII操作者双『力法1.观察甲、乙、丙、丁四幅图，熟悉倒平板的操作流程，请填空:甲乙丙丁(1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙一乙一甲一丁。(2)甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。⑶丁屮的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。1.下图中卬为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果:(1)每一次划线示都要将接种环灼烧(V)(

6、2)除笫一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端(X)提示平板划线时除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，而不是第一次。2.如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考:AB(1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？捉示获得效果A的接种方法为涂布分离法，获得效果B的接种方法为划线分离法。(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？提示最可能的原因是菌液浓度过高或划线吋在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的

7、措施是增人稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。解题探究剖析题型提炼方法1.卜•图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请凹答卜•列问题:A.配制培养基—*B.火菌—C.扩人培养液体培养基D.划线分离和培养固体培养基—>E.菌种保存(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为培养基。配制吋除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持o对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的(填“前面”或“后面”)。（2）D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是,E过程所需的温度是（3）0过程后，一个菌体便会形成一个,这种分离

8、方法是的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法乙一。（4）植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进（5）植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是（）A.接种环和蹑子B.三角瓶和广口瓶C.发芽培养基和生根培养基D.用于