41蛋白质分离技术

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1、）的）,移动速度（）,而）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在课题3蛋白质的提取和分离教材预览导言思體仁分离生物大分子的基本思路是什么？提示：选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。思考厶蛋白质的分离和提取的原理是什么？提示：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。思考3：高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？提示•变性、变性、空间结构思考4：人

2、们用鸡的红细胞提取DNA,用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？提示：鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA,便于进行DNA的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白问题探讨1.与其他真核细胞相比，红细胞的特点及这一特点对进行蛋白质的分离的意义？提示：哺乳动物及人的成熟的红细胞是双面凹圆饼状，没有细胞核和细胞器。其含有的血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判斷什么时候应该收集脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。2.电泳的作用及其原

3、理。提示：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物大分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核昔酸、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH下会带上正电或负电；在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极方向移动。电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。本节聚焦本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子

4、的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。学习过程蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。在本课题中，我们将学习蛋白质分离方法中的凝胶色谱法。一.基础知识：（一）凝胶色谱法（分配色谱法）：），利用具有网状结构的凝胶的分1、概念：根据被分离蛋白质的（子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）,移动速度（-）,相

5、对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3、具体过程：OOCOOoooOOboo(2)(3)(4)(5)ooooooOO蛋口质容易进入凝胶内部的通道，路程（A.的蛋白质由于作用进入凝胶颗粒内部而被滞留；的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之I'可迅速通过。B.（1）混合物上柱；（2）洗脱开始，的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；（3）的蛋白质被滞留；的蛋白质被向下移动。（4）不同的蛋白质分子完全分开；（5）的蛋白质行程较短，己从中洗脱出來,的蛋白质还在行进屮。（二）缓冲溶液：1

6、、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。2、作用：能够抵制（）的对溶液的（）的影响，维持PH基本不变。3、缓冲溶液的配制通常由（）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（）就可以制得（）使用的缓冲液。思考：说出人体血液中缓冲对？思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？提示：使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和

7、材料的科学研究（活性）（三）电泳：1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2、原理：许多重要的生物大分子，如（）等都具有（）在（）下，这些基团会带上（）O在电场的作用下，这些带电分子会向着与其（）移动。电泳利用了待分离样品屮各种分子（）以及分子本身（）、（）的不同使带电分子产生不同的（）,从而实现样品中各种分子的分离。加入待分离的样品带电性质、分子大小和形状的不4使分子迁移速I阳极分子向阳极移动缓冲液凝胶电泳原理示意图3、分类：r琼脂糖凝胶电泳1聚丙稀酰胺凝胶电泳。测定，蛋白质相对分子质

8、量）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入（）oSDS能使蛋白质发生完全变性。rti几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是（）。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质一SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于（）o【疑难点拨】1•凝胶色谱法分离蛋白