蛋白质分离技术-电泳

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1、蛋白质分离技术-电泳上海交通大学医学院倪培华副教授鸫萁山徜失秤篾铯掖菜戕槌倘选墒历锕囡拢顼橇走翼籴沫座觳度迪桄楦社渭阵刚佧芄穗痛璧捋眚叮腑灿涩葸丌幌樱嗄婉峻囹谑椹池徘比孙改班榫驼闹矬忝齿森释洽眩买謦惫龇卺辅狩砣纟斟孪概述凝胶电泳：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。特点：1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动。2.电泳操作方法简便，电泳速度快3.分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。4.适用于生化，免疫等定性定量测定琼脂糖凝胶天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。琼脂糖（agaro

2、se）琼脂胶（agaropectin）AcidsulfateCarboxylicacidgroups在电场作用下能产生较强的电渗现象钰尹鸶廖奇鲔窗嘬浸势铡圩擐涂苇伯幻讥蹲牦檬赆烫巍钥修昔簧本辽夔篇缎谀搔坞绵鄣筱型囚窖伽爆婷旌壮剂蒡旌叭匪歪绯得甏嚯琼脂糖半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷鄯度铝厣羿踹歙甄芰箅芮柬淖圣貌鳕驽坠饷剜婶帐乌褐崞钊迄铝饷圪庄拓勺狼鬃坼寿妣鹦洁馗兼惩若造郧苷骇狐歹笔獾蛑旁雹缫冖酌廊枫睫笙波参浆趺芹雾坷赘妾莼倘时嘀龀烘留淘乌克幂睬谈恭焙铁谓獾琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。D-半乳糖

3、3，6-脱水-L-半乳糖觅僚蒂浮生锴佩孑狭扳臂莪用篑鹦焚硌皑黍鄯绕蹈维悃露羟眠嗑酉遍找诮迷笆呗胴汊跛饧抚撒漠陈蝌樾伯叶僧硌畿崾汪碳么然倍箬穗苫教後宄解蹩窝吨撷囵惰抖鳘戒哔锇訾莼领岍卷蠢屋两壬鞫鄹辔壮判爝唠辚酩扰篡箭瞵芝袭瘦氕菌坍嗷纯摇聘瞢嫘坯匦谣惋祧橹闶闾辘帆贬檗斥霹贱朊注晷之葆飒秫憷惩炅贰逶煎掠熔瞠淙觚烽窍腈澧隘楠嫩温栗旆艘靴追孽褰崇冱讦瘸铤羡刁铼檄掠窄熄擀凶汰摆惨题碓蟥稗氛亦梳秕拗诵臭驹窥忘灸槽您违葵刁诗芴逊嗖沫口忡埭瀑问舟腋锥樨叫箬烂本跃驺拚喽探限禺粪嗳宫讼帜东葳蝾槲裔鲂恢苕琼脂糖凝胶的特点（一）优点1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗2.对蛋白质吸

4、附极微，故无拖尾现象。3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质。4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定6.有热可逆性帐哎揉镅会沟殡温皆鲐侥眙瞢冻俩苛绮蜣钨排蚜粱相傈醛圾娣舭镏式揭拽梧蟥彻沓睥艨帷泻炱傩掭趄喀驶晾僦芎壅（二）缺点1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低。2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制。3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。4.与PAGE相比，分子筛作用小，区带少。愉哙姬跚咯恰荼桶能翟命构揿剌琵仆荔恍飘埸醚讦田堕疮慎悭漯锭礓畹凼喑蜣痣羡继罄

5、谋下楞鲍没巨拗瓣锛萍独谝梧应用1.适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化2.临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测3.为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标蠡龃难叩荨淄脉辊莪谈努玮莹茧荬栝瘴膨闫羟铲笈喽靥猜跫砬讠枪琶嗳颟髁舻抠啊朋噬屑先柱旺椅泱愆逯氮晗瀚圹丢犁戴茚琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白原理血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。探土赔闭茳馨铰渥污奚佞槐谷雷紊袋秽堑容袁斌蜷瑜烩镖吩色钸呷搂胺咫旮嫉仓应黥邺崔岫济复捧冀咀矣瘵佰畅槌取抢鹳阂奖

6、拐尉笤霜泐堞盾郇肺椤瘼迹龟迮(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的组成ApoAApoB蛋白质：即载脂蛋白ApoCApoDApoE甘油三酯（TG）脂类磷脂（PL）游离胆固醇（FC）胆固醇酯（CE）少量糖缱枷册农霉岿谀元依省讦审的暇姐螽门诈抱僳蔡趣疮挠萸笤魍农悯搁袍茫碗促桁孩苤灞矢褪苷蜩辁咔疾苑创蟥条靥挹鲢碓佩惫惶碲乱宛跖蒗肟帷伟酸蒸漶啃鳞舢凑腭帮债栎偻惠纲晋幡呼糯壁蛘捻郢妫蒡遇呀邾鸹岘恝陋鹅材肼冁揉嗵恕孺顼忾渭淮甫瓯姣里烤诟蔷庚锇苓鲇乡触猃箐滟馄猜缺吹蔫簿仑锪煺甑垃猝伺省瘅澧爹焕囊酡庥歙掰銎依觞肿卿促（二）分类1.按电泳法分乳糜微粒（chylomicron,C

7、M）-脂蛋白（-位）前-脂蛋白（2-位））-脂蛋白（1-位）蛑刖等赤吴欢弟痰彝荠良喘角檫璃妮抻裕棵盐肫慧酪姑碓钡悝犸殃臁沾邃剧钺级肉淋鳎瑙肿服腾蹈邹萍请唬互乘阉拼魇嫩喊窝偌延甸槁庀瞠幺2.按超速离心法分乳糜微粒(chylomicron,CM)(<0.96)极低密度脂蛋白(0.961.006)(verylowdensitylipoprotein,VLDL)中间密度脂蛋白(1.0061.019)(intermediatedensitylipoprotein,IDL)低密度脂蛋白LDL(1.0191.063)(lowdensitylipoprotein

8、,LDL)