整合素和粘着斑激酶在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的作用

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1、整合素和粘着斑激酶在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的作用第3,1卷第期第13贝2005年10月华屮科技大学学报（医学版）maMedl.]nivScil'echnolHuazhongVbl.34NO.5F.513（）n.2005博士后制度实施二十周年纪念专栏整合素和粘着斑激酶在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的作用陆俊羽张珍祥徐永健邹晖倪望陈丄新华中科技大学同济I矢学院附属同济I矢院呼吸内科•武汉430030*摘要口的探讨整合素和存斑激酶是否在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞（PAsMCs）迁移调控中起作用•方法前期实验将Jw・,核鹏基因构建到逆

2、转录病毒载体plXSN上,转染人体外培养的人PASMCs内，并证实转染的JWA特异性核酶基凶能抑制PASMCs内JwA基因的表达.该研究应用改良Boyden小室法测定细胞迁移情况•半定RT—FCR（sqRT—ICR）法测定细胞内整合素av,整合素B粘着斑激酶的mRNA表达量.Westernblot法检测细胞内整合素g整合素B,粘着斑激酶的蛋白表达量.结果与空载体转染细胞（PplXSN组）及未转染细胞（PAsMcs组）比较.转染JWA核酶基因的细胞（P—JwARz组）迁移率显着增加，细胞内整合素二整合素B粘着斑激酶的mRNA及蛋白表达量均显着增加.结论整合素，粘着斑激酶信号通路可能在JW

3、A慕因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移屮起调控作用.关键词肌,平滑;整合素;粘着斑激酶中图法分类号R322.7RoleoflntegrinandFocalAdhesionKinaseintheRegulationofHumanPulmonaryArterySmoothMuscleCellsMigrationlnducedbylnhibitionofJWAGeneinvitroIuJunyu,ZhangZhenxiang,XuYongjianetalDepartmentOJRespiratoryDiseases-TongjiHospitahTongJiMedic^lCollege,Hua

4、zhongUniversity0/S(iemeandTe{.hnology,Wuhan430030AbstractObjectiveToinvestigatetheroleOfintegrinandfocaladhesionkinase(FAK)intheregulationOfhumanpul一monaryarterysmoothmusclecellsmigrationinducedbyinhibitionOfJWAgene1H71vitro.MethodsJWAribozymegenewassubclonedintotheretroviralvectorplXSNandtherec

5、ombinantretroviralvectorwastransfectedintotheculturedPASMCs.ThetransfectedJWAspecificribozymewasconfirmedtOinhibittheexpressionOfJWAgeneinthePASMCs.CellmigrationwasmeasuredbyusingmodifiedBoydenchambe匚ThemRNAexpressionOfintegrina”,integrin8andFAKincellswasde一tectedbysemi一quantitativeRT一PCRandthep

6、roteinexpressionOfintegrina„integrinB3andFAKbyWesternblot.ResultsIncontrasttOnormalPASMCsgroupandPASMCstransfectedonlywithpIXSNvector(P—plXSNgroup),thenumberOfmi一gratingcellsinthecellstransfectedwithJWAribozymegene(P一JWARZgroup)wasincreasedsignificantly.Meanwhile.themRNAandproteinexpressionOfint

7、egrina^integrin良andFAKinthesecellswasalsoincreasedsignificantly.ConclusionIntegrinandFAKsignalpathwaymayplayaroleinmigrationregulationOfhumanPASMCsinducedbyinhibitionOfJWAgeneexpressionillvitro・Keywordsmuscle,smooth;integrin