王春来猪传染性胸膜肺炎菌影疫苗的的研制ppt课件

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1、猪传染性胸膜肺炎菌影疫苗的研制王春来细菌动物病创新团队中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪病论坛深圳2014.04.29概述病原菌：胸膜肺炎放线杆菌（APP）疾病特征：肺脏出血、坏死以及与胸膜发生纤维素性粘连危害：世界范围内的多发病、常见病规模化猪场猪呼吸系统综合征（PRDC）的主要病原之一急性爆发：致死率可高达100％慢性感染：高发病率，患猪表现为生长迟滞、饲料利用率低、日增重明显下降等，可谓损失巨大。APP包括15个血清型，各个血清型间毒力差异较大，但引起的疾病症状相同。主要毒力因子：Apx毒素（ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ）荚膜多糖（CP）脂多糖内毒素（LPS）

2、外膜蛋白（OMP）转铁蛋白结合蛋白（Tbp）粘附素（Adhesin）蛋白酶（Protease）铁摄取调控因子（Fur）我国APP疫苗研究进展灭活苗(全菌体通过加热或用甲醛灭活后制备的一种疫苗)血清1、2、7型三价苗（武汉科前）血清1、3、7型三价苗（中农威特）血清1、7二价苗（山东华宏）亚单位疫苗（APP主要毒力因子及保护性抗原为主要组分的疫苗）保猪利®爱普克（PorcilisAPPR,Intervet）（ApxⅠ＋ApxⅡ＋ApxⅢ＋OMP）哈尔滨兽医研究所（目前处于临床前研究阶段）弱毒活疫苗（人工缺失或灭活某一种或几种毒力因子致弱的活疫苗）华中农业大学（APP1Δapx

3、ICΔapxIICΔORF1，注册新兽药证书）哈尔滨兽医研究所（APP7ΔclpPΔapxIICΔfur，申报转基因安全评价）Ghost（菌影）疫苗（细菌裂解后剩下的空壳制备的一种疫苗）哈尔滨兽医研究所目前处于临床前研究阶段疫苗优点缺点灭活苗安全，易于生产同型保护，交叉保护性差，只能减少死亡率，不能阻止感染和发病亚单位疫苗包含毒素等分泌性成分，交叉保护性好生产过程繁琐，成本高弱毒活疫苗免疫原性及交叉保护性好，能够阻止APP在呼吸道定居安全性差，有返祖的可能，因为APP毒力因子众多，只缺失一个或几个毒力因子尚不能使毒力减弱到安全使用的水平，所以目前尚无一种活疫苗被批准上市Gh

4、ost（菌影）疫苗兼具灭活苗的安全性和活苗的有效性，能够阻止APP在呼吸道定居未知猪传染性胸膜肺炎菌影ghost疫苗的研制Ghost（菌影）简介近年来出现的一种新概念、新技术一种没有细胞浆和核酸的空细菌体利用噬菌体ΦX174裂解基因E在革兰氏阴性细菌中表达后，该基因编码蛋白在细菌细胞膜和胞壁上可形成穿膜孔道，在渗透压的作用下使菌体破裂，细菌内细胞浆和核酸等成分通过此孔道被排出，形成的一种空的细菌外壳，即为“菌影”，也称“菌蜕”。Ebensenetal.,JImmunol,2004Witteetal.,JBacteriol,1990扫描电镜透射电镜Ghost制作流程示意图电转

5、化诱导表达宿主菌Ghost提取ΦX174DNAPCRLysisE插入pBV-220中pBV-EPCR插入穿梭载体中pXXX-E2842℃目前，国外已经成功制备成菌影的细菌包括大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、肺炎克雷伯氏杆菌、支气管败血博特氏杆菌、幽门螺旋杆菌、霍乱弧菌、胸膜肺炎放线杆菌、流感嗜血杆菌、溶血巴氏杆菌、多杀巴氏杆菌、绿脓杆菌、恶臭假单胞菌等。说明只要具备合适的遗传操作系统，基于噬菌体裂解基因Ｅ的裂解系统几乎适用于所有的革兰氏阴性细菌。目前我们实验室已成功制备了胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的菌影。Ghost疫苗的优点是一种基因工程死苗，不含任何核酸成分，

6、安全；由于ghost疫苗利用的是基因工程方法使菌体裂解灭活，没有经过物理或化学的变性过程（如甲醛灭活处理），所以菌体表面构象与活菌相似，提呈的是天然抗原决定簇，免疫原性好；可以激发特异的体液免疫和细胞免疫应答；交叉保护能力优于灭活苗；优良的佐剂效应，菌影细胞表面含有脂多糖和肽聚糖，具有佐剂作用；诱导的免疫反应水平达到或超过福氏完全佐剂；生产工艺简单，不需添加佐剂，可冻干保存，不需冷链条件运输和保存。App及菌影透射电镜照片正常APP细菌APP菌影重组菌株——APP1（pGZRS-E）正常APP细菌APP菌影App及菌影扫描电镜照片批次接种剂量（CFU）猪数猪体反应体温体重1

7、X1095精神、食欲正常正常正常1006061X10105精神、食欲正常正常正常1X10115精神、食欲正常一过性升高正常1X1095精神、食欲正常正常正常1006121X10105精神、食欲正常正常正常1X10115精神、食欲正常一过性升高正常正常剂量及大剂量免疫情况Appghost对断奶仔猪的安全性试验Appghost不同剂量免疫对仔猪体温的影响Appghost不同剂量免疫对仔猪体重的影响Appghost对怀孕母猪的安全性试验批次接种剂量（CFU）猪数猪体反应体温1006061x1093精神、食欲、产仔正常正常