吡那地尔对癫痫持续状态大鼠海马神经元保护作用及对Bcl―2和Caspase―3表达的影响

《吡那地尔对癫痫持续状态大鼠海马神经元保护作用及对Bcl―2和Caspase―3表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、毗那地尔对癫痫持续状态大鼠海马神经元保护作用及对Bel—2和Caspase—3表达的影响摘要：目的研究毗那地尔对癫痫持续状态大鼠海马神经元保护作用及可能机制。方法随机将96只大鼠分成N组、SE组、Pin组、Gli组，每组按SE后12h、24h、72h、5d分为4亚组，用LiCl-PILO法进行SE动物造模，采用SABC检测Bel-2>Caspase-3,TUNEL法检测凋亡细胞。结果N组TUNEL阳性细胞、Bel-2及Caspase-3均有基础表达。SE组、Pin组、Gli组TUNEL阳性细胞均在72h达峰值、Caspase-3均在24h达峰值。同时间点比较，SE组、Pi

2、n组、Gli组较N组均明显增多；Pin组较SE组、Gli组均明显减少；SE组与Gli组比较差异无统计学意义。SE组、Pin组、Gli组Bel-2均在12h达高峰。同时间点比较，SE组、Pin组、Gli组较N组均明显增多；Pin组较SE、Gli组均明显减低；SE组与Gli组比较差异无统计学意义。结论毗那地尔可上调Bcl・2表达，抑制Caspase-3释放，对SE大鼠有脑保护作用，格列毗嗪拮抗毗那地尔此作用。关键词：癫痫持续状态；卩比那地尔；Bel-2；Caspase-3中图分类号：R742.1R259文献标识码：A癫痫持续状态为神经科常见急症之一，指癫痫连续发作间意识未完全

3、恢复又频繁发作，或发作时间持续30min以上不能自行停止。反复癫痫发作或SE会造成脑损伤[1,2],凋亡在这种脑损伤中起重要作用[3,4]0近年来，ATP敏感性钾通道开放剂对癫痫的脑保护作用成为研究热点。本实验通过毗那地尔及格列毗嗪干预SE大鼠，观察TUNEL阳性细胞、Bcl-2及Caspase-3指标，探讨pinacidil对SE大鼠海马神经元保护作用，为临床治疗癫痫提供理论依据。1材料及方法1.1材料雄性健康Wistar大鼠96只由山西医科大学实验动物中心提供；氯化锂由中国医药集团公司提供；匹罗卡品、毗那地尔、格列毗嗪由美国Sigma公司提供；TUNEL、SABC试剂

4、盒、Bcl-2及Caspase-3抗体、DAB显色剂由武汉博士德试剂公司提供；余试剂均为市售分析纯品。1.2动物造模及分组随机将96只大鼠分成对照组、癫痫组、毗那地尔组、格列毗嗪组,每组按SE后12h、24h、72h、5d分为4个亚组，每组6只大鼠。所有大鼠腹腔注射LiCl125mg/kg,SE组大鼠20h后腹腔注射PILO30mg/kg；Pin组于注射PILO前30min腹腔注射毗那地尔10

5、iL；Gli组于注射PILO前50min腹腔注射格列毗嗪10pL,隔20min后予毗那地尔10pL腹腔注射；N组、SE组、Pin组于相应时间点腹腔注射等量生理盐水。观察大鼠行为变化

6、，依据Racine评分标准判定癫痫发作级别，达IV级〜V级发作归于实验组，不符合模型或死亡者应剔除并补充相应数目大鼠保证样本量。癫痫发作持续30min以上者为SE发作，SE达1h后腹腔注射地西泮10mg/kg终止发作。1.3标本处理实验组大鼠用10%水合氯醛深度麻醉，断头取出脑组织置于4%多聚甲醛液中固定，经脱水、透明、浸蜡及包埋后，在视交叉后海马区连续冠状切片，隔15张连续取4张片，做4套分别行HE染色及三项指标检测。1.4凋亡细胞检测按TUNEL试剂盒说明书操作，观察到凋亡细胞的胞核中含棕黄色颗粒物。1.5Bcl-2、Caspase-3检测按试剂盒操作,用SABC法、

7、DAB染色，胞浆或者核膜着色呈现棕黄色为Bcl-2阳性细胞；胞浆或胞核内含有棕黄色沉淀物为Caspase-3阳性细胞。1.6结果处理平均每张切片取5个视野，算出每个视野的Bcl-2、Caspase-3>TUNEL阳性细胞数并计算其平均数。1.7统计学处理计量资料用均数土标准差表示，用SPSS21.0统计软件行析因方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1SE大鼠行为学观察除N组无癫痫发作外,其他实验组大鼠在腹腔注射PILO15min〜30min后均出现咀嚼、流涎、节律点头等动作，之后出现单侧前肢抽搐、阵挛、直立到双侧前肢抽搐、阵挛、身体立起，最后出现强直-阵挛

8、全面发作，后跌倒，SE发作程度达IV级〜V级，Pin组较SE组发作程度轻，多在III级〜IV级，Gli组与SE组程度基本一致。2.1HE染色结果N组神经元基本紧密排列，胞核为卵圆形、圆形，染色质分布均匀、胞浆透明，核仁清晰；SE组、Gli组细胞排列紊乱，胞浆红染、嗜酸性，胞体缩小，核固缩；Pin组细胞尚排列整齐，形态尚正常，偶有嗜酸性染色细胞。2.2TUNEL阳性细胞检测观察大鼠海马CA1及CA3区，N组少量TUNEL阳性细胞，SE组、Pin组、Gli组均在12h出现TUNEL阳性细胞，24h逐渐增多，72h达峰值，持续至5d