人端粒酶在肿瘤方面的临床诊断和治疗前景

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1、人端粒酶在肿瘤方面的临床诊断和治疗前景姓名：龙康班组：2016级12班3组学号：201650589摘要：端粒酶自从被发现以來就是酶界的宠儿，是临床研究的热点之一。我们普遍认为,肿瘤是由破坏细胞正常生长调节的多种基因突变引起，局部组织的细胞在基因水平上失去对机体生长的正常调控导致异常增生与分化。近十多年来的实验和临床研究表明，端粒酶在肿瘤的发生过程中扮演着极其关键的作用，端粒酶在维持染色体长度，抑制肿瘤的发生，延缓衰老，调节正常细胞生长方面起着很大的作用。关键词：端粒酶肿瘤永生化临床诊断治疗前景综述前言：2

2、009年诺贝尔生理学或医学奖授予美国加利福尼亚人学的ElizabethBlackburn,美国巴尔的CarolGreider,美国哈佛庚学院的JackSzostak以及霍华徳休斯医学研究所，以表彰他们发现了端粒和端粒酶保护染色体的机理，该机理对肿瘤的研究具有重要的意义。研究表明，在极大数的肿瘤细胞中都可以检测到端粒酶呈阳性。本文将对人端粒酶在肿瘤方面的临床诊断和治疗前景进行介绍。1■.端粒与端粒酶的关系1.1端粒和端粒酶的定义端粒是染色体末端由重复DNA序列和相关蛋白组成的特殊结构，具有稳定染色体结构和完

3、整性的功能，人端粒是由6个碱基重复序列(TTAGGG)和结合蛋口组成。端粒酶是使端粒延伸的反转录DNA合成酶，是个由RNA和蛋白质组成的核糖核酸■蛋白复合物，是一种核蛋白逆转录酶，实质上是RNA依赖的DNA聚合酶。端粒酶的结构包括三个部分：端粒酶RNA(hTR)和端粒酶催化亚单位(hTERT)以及端粒酶相关蛋白，其中hTR和hTERT最重要的结构。端粒酶以自身RNA为模板，合成端粒DNA,将端粒DNA加至真核细胞染色体末端。1.2端粒和端粒酶的作用端粒有稳定染色体末端结构，保持染色体DNA遗传信息复制的完

4、整性的功能。研究表明，它还与细胞衰老有关，细胞越年轻，端粒越长：细胞越老，端粒越短。端粒酶通过明显的模板依赖方式每次添加一个核甘酸。端粒酶的功能是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度。2端粒酶与不同肿瘤的发生诊断与治疗前景2.1端粒酶活性检测方法研究表明，永生化细胞是一种在理化刺激、基因突变、病毒感染等外界刺激下，可以在体外无限增殖的不衰老细胞株。【1】端粒酶具有抑制细胞衰老的作用，永牛化是细胞癌变的关键。肿瘤细胞的一个特点是无限增殖，不断分裂，在大多数的肿瘤细胞中，端粒酶是

5、活化的，检测呈阳性。在人体正常的组织细胞中，也有呈现阳性的端粒酶，比如生殖细胞、睾丸、卵巢、胎盘及胎儿细胞中此酶为阳性。自从1994年，Kim开始应用一种基于PCR的灵敏的端粒酶检测方法TRAP来探测人体组织中的端粒酶活性后，Shay等发现90%的恶性肿瘤组织的端粒酶活性呈阳性。【2】。人端粒酶在肿瘤方面的临床诊断是根据检测端粒酶呈现阳性或者阴性来判断组织细胞是否癌变,目前，检测端粒酶活性主要有以下儿种。2.1.1TRAP-银染法端粒酶根据TRAP法适当改良的TRAP-银染法端粒酶活性检测已经在临床上得到

6、广泛应用。TRAP-银染法端粒酶活性检测的原理：利用端粒酶在体外可以以其口身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核廿酸链的末端添加6个碱基的重复序列的特性，采用PCR方法扩增此重攵序列，并进而用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立的TRAP法，其主要原理如下：首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成AGGGTTAG,然后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延

7、伸产物。TRAP-银染法端粒酶活性检测法利用银染技术检测端粒酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp的梯状条带，条带的多、寡、深或浅表示端粒酶活性的大小。TRAP-银染法保留了传统TRAP法灵敏度高、特异性强等优点，避免了同位素的放射污染。同时，还增设了内标准物，提供阳性对照品，优化了引物设计，使PCR效果进一步提高，使之能够高灵敏的检测到细胞和组织提取物屮端粒酶的活性。2.1.2原味杂交原味杂交的方法是通过提取细胞的总RNA,将总RNA反转录成cDNA,克隆含有motif-T的cDYA序列的目的片段

8、，合成特异探针，进行原位杂交，然后检测是否有hTERTmRNA的转录，从而确定是否具有端粒酶的活性。由于对motif—T的检测是结构性检测，测量结果的灵皱度和特异性强，从而为端粒酶的活性检测提供一个精确、简便的方法，因而本发明在肿瘤的诊断、治疗和预后的评估等方面，以及对细胞系的基础研究，都具有十分重要的应用价值。端粒酶活性检测的方法还有：育接测试法：TRAPT臭化乙锭法.TRAP-杂交保护法、TRAP-闪烁接近法、TRAP-酶